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T/G HA－VSMC（人血管平滑肌細胞）說明書

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公司名稱上海邦景實業有限公司
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型號
所在地上海市
廠商性質其他
更新時間2021/4/6 14:47:34
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產品標簽:

T/G HA－VSMC 人血管平滑肌細胞 5×106cells

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上海邦景實業有限公司（Shanghai Bangjing Industrial Co., Ltd.，China）是一家生物企業,主要從事免疫學、分子生物學和常規生化試劑的銷售。主營產品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細胞株、原代細胞、細胞培養基、標準溶液產品。代理并銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產品。

上海邦景實業有限公司（Shanghai Bangjing Industrial Co., Ltd.，China）先后與天津中醫學院、復旦大學、上海交通大學醫學院、上海交通大學、華東師范大學、第二軍醫大學、南京大學，暨南大學，南京工業大學，曙光醫院、華山醫院、瑞金醫院、上海有機研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒，種屬標本齊全,有專門針對人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細胞培養上清液、組織勻漿、組織液等標本的試劑盒；另有針對各種動物（鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚）的科研試劑。

公司秉承“專注品質、信守承諾、積極溝通、創新服務”的企業文化積極參與生物領域的技術創新和技術服務，力求為我國科研事業更好的，更專業的服務！

公司售后服務宗旨:有質量問題可申請退換，有技術疑問可隨時給于解答，一對一的客服服務，客戶的需求也是我們不斷的更新服務。

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產品簡介在線詢價

T/G HA－VSMC（人血管平滑肌細胞）說明書加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化（比如，每隔10分鐘），如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。

T/G HA－VSMC（人血管平滑肌細胞）說明書產品信息

實驗事項：
1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2. 加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。
3. 孵育：為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4. 洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數。
5. 試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6. 反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7. 底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。

運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

產品名稱	T/G HA－VSMC(人血管平滑肌細胞)說明書
英文名稱	T/G HAVSMC (human vascular smooth muscle cells)
規格	5×106cells

培養：
1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺內，固定在泡沫板上。
2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開皮膚一個橫切口，將皮膚向上撕開，然后剪開肌肉等，暴露出腹腔，在左側找到脾臟，用彎頭眼科鑷取出脾臟，置于無菌培養皿中。
3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無用的組織。
4.將篩網置于平皿中，脾臟置于篩網上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網上進行碾磨，同時不停滴加不含血清的培養液沖洗。
5.將碾磨好的細胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。
6.加入10ml培養液，吹打混勻，取樣計數。
7.將稀釋好的細胞懸液分裝于培養瓶中，輕輕搖晃混勻，在培養瓶上。
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細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代原代培養的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數常規消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數，按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液＝(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率指數生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) =計算貼壁率。
1.6 生長曲線取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔，計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d，繪制細胞生長曲線。