PrimaCell™人膀胱癌組織源細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

小鼠吲哚胺2,3-雙加氧酶2(IDO2)ELISA試劑盒 ，英文名： IDO2 ELISA Kit  256925-92-5升麻酮醇-3-O-α-L-拉伯糖苷說明書  Cimigenol-3-O-α-L-arabinoside

膠原酶I(CollagenaseI)ELISA檢測試劑盒RabbitCollagenaseIELISAKit 96T/48T  20086-06-0黃獨素B品牌  Diosbulbin B

犬肌酐(Cr)試劑盒 Canine Creatinine,CR ELISA KIT  27215-14-1新穿心蓮內(nèi)酯規(guī)格  Neoandrographolide

英文名稱HumanSHBGELISAKit人性激素結合球蛋白(SHBG)規(guī)格：96T/48T  62596-29-6桑辛素  Morusin

化線粒體氧化應激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒20  3570-40-9白綿馬素AA說明書  Albaspidin AA
11021-13-9人參皂苷Rb2  Ginsenoside Rb2  英文名稱RatCXCL2/MIP-2ELISAKit大鼠CXCL2/MIP-2規(guī)格：96T/48T

11013-97-1甲基橙皮苷規(guī)格  Methyl hesperidin   英文名稱RatCXCL16ELISAKit大鼠B-細胞趨化因子16(CXCL16)規(guī)格：96T/48T

110026-03-4牛磺豬去氧膽酸說明書   Taurohyodeoxycholic acid  salt hydrate  英文名稱RatCXCL12ELISAKit大鼠B-細胞趨化因子12(CXCL12)規(guī)格：96T/48T

108853-14-1石斛酚規(guī)格  dendrophenol  英文名稱RatCXCL10ELISAKit大鼠B-細胞趨化因子10(CXCL11)規(guī)格：96T/48T

108340-60-9靈芝酸D  Ganoderic acid D     英文名稱RatCTX-IELISAKit大鼠I型膠原C端肽規(guī)格：96T/48T
載玻片細胞TNFBETA蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20  146501-37-3沙苑子苷A說明書  Complanatoside A

Mouse17-Hydroxycoicosteroids,17-OHCSELISA試劑盒小鼠17羥皮質(zhì)類(17-OHCS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  山麥冬皂苷B品牌  Liriopesides B

小鼠脂聯(lián)素(Adiponectin/Acrp30)ELISA試劑盒 ，英文名： Adiponectin/Acrp30 ELISA Kit  40437-72-7山柰酚-3-O-葡萄糖鼠李糖苷規(guī)格  Kaempeerol-3-Oglucorhamnoside

牛胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA檢測試劑盒BovineInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISAKit 96T/48T  4373-41-5山楂酸  Maslinic acid

人alpha突觸核蛋白(淀粉樣前體非A4成分蛋白)低聚物(SNCA oligomer)試劑盒 Human SNCA oligomer ELISA Kit  64421-28-9山梔苷甲酯說明書  Dipsacoside B
PrimaCell™人膀胱癌組織源細胞試劑盒說明書毛冬青皂苷B3  ilexsaponin B3  組織前列腺型酸性1酸酶(PACP)活性比色法定量檢測試劑盒20

毛冬青皂苷B2規(guī)格  ilexsaponin B2  組織葡萄糖激酶(glucosekinase)比色法定量檢測試劑盒20

毛冬青皂苷B1說明書  ilexsaponin B1  組織葡萄糖-6-1酸脫氫酶(G6PD)活性酶動力比色法定量檢測試劑盒50

毛冬青皂苷B1品牌  ilexsaponin B1  組織脯氨酸肽酶(prolidase;PLD)紫外比色法定量檢測試劑盒20

毛地黃素  Digitaline  組織脯氨酸羥化酶(prolilhydroxylase)活性比色法定量檢測試劑盒20

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。