培養操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
產品參數：
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 產品貨號 |
BTK抑制劑(QL47) | QL47 | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg | BJ-01X8128 |
商品詳細介紹：
QL47不可逆的BTK抑制劑，IC50為7nM。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ ：1469988-75-7 別名：BTK Inhibitor 純度：99.03% 分子量：447.49 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
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BTK抑制劑(QL47)ALDH1抑制劑(Disulfiram) 1mL(10mM)|1g|5g Disulfiram1瓶 BIU-87/Adr細胞株 BIU-87/Adr 低溫運輸和保存
DPP-4抑制劑(Teneligliptin) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|250mg Teneligliptin品紅亞瓊脂平板（9cm） Fuchsin Basic Sodium Sulfide Agar 10個/包
MAO-A抑制劑(Clorgiline hydrochloride) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg Clorgiline hydrochloride100U Red-Taq DNA聚合
Foxo1抑制劑(AS1842856) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg AS1842856250mL Para-formaldehyde in Phosphate Buffer Para-formaldehyde in Phosphate Buffer 常溫保存
CaMK-II抑制劑(KN-62) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg KN-625nmol 接頭DNA（pSma I） Adaptors -20℃保存
DGAT-1抑制劑(A 922500) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg A 9225002 ug pMXmKate(650) pMXmKate(650) 低溫運輸，-20℃保存
質子泵抑制劑(Omeprazole) 1mL(10mM)|100mg|500mg OmeprazoleNLN培養基 NLN Medium 250g
PKC抑制劑(Bisindolylmaleimide I) 1mL(10mM)|1mg|5mg Bisindolylmaleimide I1瓶 T24細胞株 T24 低溫運輸和保存
CaM-KK抑制劑(STO-609) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg STO-609利茲不動桿菌培養基 Leeds Acinetobacter Medium 250g
HMG-CoA還原酶抑制劑(Pitavastatin Calcium) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg Pitavastatin Calcium1g 石榴紅硫酸鹽 Fast Garnet GBC Salt 室溫避光保存
ATGL抑制劑(Atglistatin) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg Atglistatin50T 麩質Gluten基因PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
