產品名稱 | 人成巨核細胞白血病細胞;MEG-01使用說明書 |
貨期 | 3-5天 |
發貨地 | 上海 |
細胞名稱 人成巨核細胞白血病細胞;MEG-01使用說明書
形態特性 淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 MEG-01細胞株源自一位CML患者成巨核細胞轉換期的骨髓細胞。 細胞質因子VIII和表面球蛋白IIb/IIIa,高碘酸-Schiff(PAS)反應,α醋酸萘酯酶和酸性磷酸酶陽性。 髓過氧化物酶,α丁酸萘酯酶,氯化醋酸AS-D萘*酯酶和堿性磷酸酶陰性。 用單克隆抗體BA-1(抗B細胞,粒性白細胞),HPL-3(抗球蛋白IIb/IIIa)和20.3(抗單核細胞,血小板)染色成陽性。 其他淋巴和骨髓類抗體成陰性。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 優質胎牛血清,10%
傳代方法 1:2。3天內可長滿。
傳代情況 U
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陽性
STR
同工酶
染色體
使用權限 B類
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
Z2 Cys Peroxiredoxin 英文名稱: 硫氧還蛋白還原酶抗體 ?0.1ml
5HT2C Receptor 英文名稱: 5-羥色胺受體2C抗體 ?0.1ml
5HT5B Receptor 英文名稱: 5-羥色胺受體5B抗體 ?0.1ml
SRRM4 英文名稱: */*相關核基質蛋白4抗體 ?0.2ml
SRRM3 英文名稱: */*相關核基質蛋白3抗體 ?0.2ml
phospho-CK II beta (Ser209) 英文名稱: 磷酸化*/*蛋白激酶II β(casein kinase IIβ)抗體 ?0.1ml
MOP5 英文名稱: 單核細胞蛋白5抗體 ?0.2ml
SAMD9 英文名稱: SAMD9蛋白抗體 ?0.2ml
SARM1 英文名稱: SARM1蛋白抗體 ?0.2ml
p150 CAF1 英文名稱: 染色質組裝因子1P155抗體 ?0.2ml普通瓊脂斜面培養基(PH8.0-8.2) 250 分離培養霍亂弧菌,*檢定用
酪胨瓊脂 Peptone from Casein Agar 250 用于生物制品無菌試驗
葡萄糖蛋白胨培養基 Dextrose Peptone Medium 250 用于生物制品無菌試驗
抗生素檢定培養基4號 Antibiotic Agar No.4 250 用于*等的效價測定
抗生素檢定培養基6號 Antibiotic Agar No.6 250 用于粘菌素等的效價測定
抗生素檢定培養基7號 Antibiotic Agar No.7 250 用于*鈉等的效價測定
抗生素檢定培養基8號 Antibiotic Agar No.8 250 用于去甲*等的效價測定
卵黃高鹽瓊脂基礎 Egg-Yolk Salt Agar Base 250 用于生物制品*選擇性分離
抗生素5號 Antibiotic No.5 250 用于*檢定菌種培養
MUG培養基 MUG Medium 100 用于大腸桿菌測定
真菌瓊脂培養基 Fungi Agar Medium 250 用于無菌生長試驗