人毒蕈堿型乙酰*受體亞型M3(M-AChR M3)elisa試劑盒血清檢測
中文名稱:人毒蕈堿型乙酰*受體亞型M3(M-AChR M3)
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本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人毒蕈堿型乙酰*受體亞型M3(M-AChR M3)水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入,再與HRP標記的結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中的濃度。
保溫在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),即加標本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當。ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機會,只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經(jīng)擴散才能達到反應(yīng)的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時間的溫育。溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應(yīng)動力學(xué)研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時,產(chǎn)物的生成可達。為加速反應(yīng),可提高反應(yīng)的溫度,有些試驗在43℃進行,但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應(yīng)4℃更為*,在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中過夜,以形成zui多的沉淀。但因所需時間太長,在ELISA中一般不予采用。保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,一般均采用水浴,可將ELISA板置于水浴箱中,ELISA板底應(yīng)貼著水面,使溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此時可讓反應(yīng)板漂浮在水面上。若用保溫箱,ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,zui后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)定的溫度,特別是在氣溫較低的時候更應(yīng)如此。無論是水浴還是濕盒溫育,反應(yīng)板均不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應(yīng),操作時的室溫應(yīng)嚴格限制在規(guī)定的范圍內(nèi),標準室溫溫度是指20-25℃,但具體操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育。室溫溫育時,ELISA板只要平置于操作臺上即可。應(yīng)注意溫育的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準確。為保證這一點,一個人操作時,一次不宜多于兩塊板同時測定。
E.Z.N.A.? Endo-free plasmid Mini Kit II-fast新方法:方便快速地從培養(yǎng)的菌液(10-15ml)中提取低內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA該試劑盒專門設(shè)計快速地從培養(yǎng)的細菌中純化低內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA,內(nèi)毒素含量小于0.1EU/ug,純化的質(zhì)粒可直接用于測序、細胞轉(zhuǎn)染、動物注射、酶切等各種用途,質(zhì)粒的產(chǎn)量依賴于質(zhì)粒的拷貝數(shù)、E.coli菌株以及生長條件,對于低拷貝菌株一次操作量可以高達100ml。
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