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上海晶抗生物工程有限公司

ELISA試劑盒的洗滌步驟

時間:2016-11-3閱讀:1267
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ELISA試劑盒的洗滌在ELISA進程中雖不是一個反應進程,但卻也決議著實驗的勝敗。ELSIA?是靠洗刷來到達別離游離的和聯絡的酶符號物的目的。通過洗刷以*殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體聯絡的物質,以及在反應進程中非特異性地吸附于固相載體的煩擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗刷時又應把這種非特異性吸附的煩擾物質洗刷下來。可以說在ELISA操作中,洗刷是zui主要的關鍵技術,應導致操作者的高度重視,操作者應嚴厲按懇求洗刷,不得大意。
洗刷的方法除某些ELISA儀器配有格外的主動洗刷儀外,手工操作有浸泡式和流水沖刷式兩種,進程如下:
浸泡式 
a.吸干或甩干孔內反應液;
b.用洗刷液過洗一遍(將洗刷液注滿板孔后,即甩去);
c.浸泡,即將洗刷液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖晃,浸泡時間不可隨意縮短;
d.吸干孔內液體。吸干應*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清洗毛巾或吸水紙上拍干;
e.重復操作c和d,洗刷3-4次(或按說明規矩)。
ELISA試劑盒在間接法中如本底較高,可增加洗刷次數或延伸浸泡時間。
微量滴定板多選用浸泡式洗刷法。
洗刷液多為含非離子型洗刷劑的中性緩沖液。
聚苯乙烯載體與蛋白質的聯絡是疏水性的,非離子型洗刷劑既含疏水基團,也含親水基團,其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵聯絡,然后削弱蛋白質與固相載體的聯絡,并借助于親水基團和水分子的聯絡效果,使蛋白質回復到水溶液情況,然后脫離固相載體。洗刷液中的非離子型洗刷劑通常是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低實驗的靈敏度。
流水沖刷式 流水沖刷法開端用于小珠載體的洗刷,洗刷液僅為蒸餾水乃至可用自來水。
洗刷時附接一格外設備,使小珠在流水沖擊下不斷地翻滾淋洗,持續沖刷2分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可。
浸泡式猶如盆浴,流水沖刷式則比方淋浴,其洗刷效果更為*,且也簡潔、敏捷。已有實驗標明,流水沖刷式一樣也適用于微量滴定板的洗刷。

ELISA試劑盒洗刷時設法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗刷效果更佳。

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