過氧化氫酶廣泛存在于植物的所有組織中，能將過氧化氫分解為氧和水，可使生物機(jī)體免受過氧化氫的毒害作用。測(cè)定過氧化氫酶的方法有測(cè)壓法、滴定法以及分光光度法等。用氧電極法測(cè)量放氧速度，方法靈敏而快速。放氧速度與過氧化氫酶活性成正比。 
儀器藥品 
氧電極儀 記錄儀 
電磁攪拌器 超級(jí)恒溫水浴 
注射器、 微量注射器 容量瓶 
反應(yīng)杯 亞硫酸鈉 
過氧化氫酶 
50mmol/L磷酸緩沖液，pH7.0（見附表2）。 
50mmol/L過氧化氫溶液：取1.4ml30%H2O2用磷酸緩沖液定容至250ml即得。 
標(biāo)準(zhǔn)過氧化氫酶溶液：稱取過氧化氫酶(Sigma)1.0mg(110U/mg)，溶于50mmol/L磷酸緩沖液(pH7.0)11ml中，使酶濃度為10U/ml。 
操作步驟 
1．儀器的標(biāo)定 
按實(shí)驗(yàn)88步驟進(jìn)行儀器的標(biāo)定，以求得記錄紙上每小格相當(dāng)?shù)暮趿俊?nbsp;
2．繪制酶活性標(biāo)準(zhǔn)曲線 
(1)在反應(yīng)杯中放滿過氧化氫磷酸緩沖液，開啟電磁攪拌器攪動(dòng)10分鐘，插入電極，吸去溢出在電極外面的溶液，調(diào)節(jié)移位旋鈕，使記錄筆位于滿刻度的10─20%左右，使記錄紙走動(dòng)，1─2分鐘后溫度達(dá)到平衡，記錄筆畫出直線。 
(2)用微量注射器從電極塞小孔中注入10μ110U/ml過氧化氫酶，立即記錄zui初90秒鐘內(nèi)的氧釋放曲線。 
(3)根據(jù)上述同樣步驟，注入不同濃度的過氧化氫酶10μl（例如濃度為20、30、40、50U/ml等），記錄氧釋放曲線。 
(4)取放氧曲線的直線部分，根據(jù)其斜率及走紙速度，計(jì)算每分鐘氧的釋放量。 
(5)以過氧化氫酶活性單位為橫坐標(biāo)，每分鐘氧的釋放量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 
3．樣品測(cè)定 
(1)在反應(yīng)懷內(nèi)注入50mmol/L過氧化氫磷酸緩沖液攪動(dòng)10分鐘，插上電極，待記錄為一直線后，注入10μl合適濃度的待測(cè)酶液樣品，立即記下zui初90秒鐘內(nèi)的放氧曲線。 
(2)根據(jù)樣品的放氧曲線，計(jì)算得到每分鐘的放氧量，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得酶活性大小。 
(3)如果沒有標(biāo)準(zhǔn)的過氧化氫酶，不能計(jì)算酶活性單位時(shí)，也可以用每分鐘的放氧量相對(duì)地表示酶的活性大小。 
實(shí)驗(yàn)作業(yè) 
1．生物體內(nèi)的過氧化氫酶有何生理意義？ 
2．過氧化氫酶與植物的其他代謝有何？ 
3．在測(cè)定時(shí)為什么只要記錄zui初90秒鐘的放氧曲線來計(jì)算酶活性？ 
參考文獻(xiàn) 
1．Goldstein, D. ．D.: 1968. ．Anal.Biochem., 24:431─437. 
2．Luis A. ．del Rio, et al.: 1977. ．Anal. ．Biochem., 80:409─415. 
3．Rorth Mikael and P. ．K. ．Jensen:1967. ．Biochem, Biophys. ．Acta, 139:171─173.