1．前言
測定小分子與核酸相互作用的親和力及鍵合選擇性，有利于闡明小分子與核酸的選擇鍵和作用以及理解其鍵合機理，有利于進一步探討小分子的結(jié)構(gòu)與核酸作用模式及其生物活性之間的關(guān)系。實驗發(fā)現(xiàn)，有一些小分子與核酸只有弱作用力，但對核酸產(chǎn)生一定作用，進而對復(fù)制、遺傳和代謝產(chǎn)生一定的影響，涉及到這一領(lǐng)域的研究還很少[1].
紫外-可見分光光度法和熒光光譜法是研究小分子與核酸相互作用機理的zui常用、zui方便的方法。許多小分子與核酸結(jié)合后，核酸或小分子的吸收光譜或發(fā)射光譜會發(fā)生變化。對光譜的這些變化進行分析處理，可獲得大分子的構(gòu)象的變化情況，甚至可獲得一些熱力學(xué)數(shù)據(jù)[2]。
苯甲酸鈉是常用的食品添加劑，在世界各國均被廣泛使用，尤其在我國。現(xiàn)在普遍認為苯甲酸無毒，但由于苯甲酸鈉使用的廣泛性，它涉及每個人的生命，對它的方方面面不斷進行研究是很有必要的。另外，苯甲酸鈉也作為藥物大劑量使用，用來治療氮代謝異常。因此對苯甲酸鈉的毒性研究，特別是和生物大分子作用的研究仍是非常重要的。
本文利用紫外-可見分光光度法及熒光光譜法，對體外苯甲酸鈉與DNA的相互作用進行了研究。
2．實驗部分
2．1 儀器與試劑
儀器：日本島津RF-540熒光光度計，美國Cary-1E紫外-可見分光光度計， 日本島津UV-240紫外-可見分光光度計，CS501型超級恒溫槽（重慶試驗設(shè)備廠）。
試劑：小牛胸腺DNA（>99%，北京百泰生化技術(shù)公司），苯甲酸鈉（PhCOONa，分析純），其余試劑是分析純或分析純以上品質(zhì)。TEN緩沖溶液（10 mM Tris-HCl / 1 mM EDTA / 2 mM NaCl, pH=7.4），磷酸鹽緩沖溶液(KH2PO4 / Na2HPO4, pH=7.4).
2. 2 熒光光譜法測定PhCOONa對DNA構(gòu)象的影響
保持DNA濃度恒定（10 μg/mL），改變PhCOONa濃度，在TEN緩沖溶液中配制一系列樣品（pH=7.4），在37 ℃溫浴1小時。自然冷卻至室溫后，分別加入熒光探劑溴化乙錠(EB)至終濃度為20 μg/mL。放置30 min后用日本島津RF-540熒光分光光度計進行測量。測定條件為：激發(fā)波長360.0 nm；激發(fā)狹縫5nm；發(fā)射狹縫5 nm；DNA-EB發(fā)射峰位在589 nm。
2．3 熒光光譜法測定DNA對PhCOONa的影響
保持PhCOONa濃度恒定（2.77 mg/mL），改變DNA濃度，在PBS緩沖溶液中配制一系列樣品（pH=7.4），在37 ℃溫浴1小時。自然冷卻至室溫后，用日本島津RF-540熒光分光光度計進行測量。測定條件為：激發(fā)波長282.0 nm；激發(fā)狹縫5 nm；發(fā)射狹縫5 nm。
2．4 紫外可見分光光度法測定PhCOONa對DNA的影響
保持DNA濃度恒定（70.0 μg/mL），改變PhCOONa濃度，在PBS緩沖溶液中配制一系列樣品（pH=7.4），以相應(yīng)的不含DNA的溶液做參比。 所有樣品和參比于37 ℃溫浴1小時后，自然冷卻至室溫，采用5 mm樣品池, 用日本島津UV-240紫外可見分光光度計進行測量。