定量pcr實驗簡明操作
2 x taqMan Universal PCR Master Mix
20 x TaqMan Gene expression Kits

1. 模板、引物及探針用量
DNA用量：10 ~ 100 ng 每反應；
cDNA用量：1 ~ 100 ng 總RNA反轉錄所得cDNA取1 μL。
引物和探針用量：
定量PCR實驗簡明操作

2．TaqMan探針法PCR反應
定量PCR實驗簡明操作
總體積 20
PCR循環參數：
50 °C 2 min → 95 °C 10 min → (92 °C 15 sec → 60 °C 1 min) × 40個循環

3．SYBR Green I熒光染料法PCR反應
定量PCR實驗簡明操作

PCR循環參數：
50 °C 2 min → 95 °C 10 min → (92 °C 15 sec → 60 °C 1 min) × 40個循環

5．7000 SDS v1.0軟件操作
檢查電腦與儀器的聯線是否正常，電腦應處于外接電源供電狀態。開電腦，待桌面圖標出現后，再打開7000主機電源，然后啟動SDS應用軟件。
新建文件 菜單File → New，Assay選擇Absolute Quantification (實時定量模式)，打開一個空白文件。
探針設置 雙擊任意一個孔，打開Well Inspector窗口。該窗口也可以從菜單View → Well Inspector打開。
使用軟件，或者探針（Detector）沒有設置好，請點擊Add Detector按鈕，打開Detector Manager窗口。該窗口也可以從菜單Tools → Detector Manager打開。如果Detector列表中沒有合適的探針，點擊按鈕File → New，新建探針：設定探針的名稱(建議使用所研究基因符號加標記熒光，如GAPDH_FAM、ACTIN_VIC等)、報告基團(FAM或者VIC)、淬滅基團(TaqMan探針選TAMRA；MGB探針選None)、顏色(任意)等。設置完成后點擊OK，該探針即出現在探針列表中。重復設立其他的探針。