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動(dòng)物染色體標(biāo)本的制備

時(shí)間:2016-10-27閱讀:1111
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一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br />1. 了解染色體標(biāo)本制備的基本原理
2. 掌握滴片法制備染色體標(biāo)本的一般步驟
二、實(shí)驗(yàn)原理
每一物種的細(xì)胞一般都具有一定數(shù)目、形狀和大小的染色體,在秋水仙素的作用下可使分裂細(xì)胞阻斷在中期,此時(shí)染色體形態(tài)zui典型,然后通過(guò)低滲、固定、染色等步驟,便可在顯微鏡下呈現(xiàn)出其形態(tài)。
三、實(shí)驗(yàn)用品
器具:顯微鏡、培養(yǎng)皿、手術(shù)剪、鑷子、冷凍載片、滴管
試劑:秋水仙素、生理鹽水、甲醇、冰醋酸、低滲液、PH6.8磷酸緩沖液、Giemsa染色液
材料:蟾蜍
四、實(shí)驗(yàn)方法步驟
1. 前處理 實(shí)驗(yàn)前3-4小時(shí),按每克體重3ug劑量給蟾蜍的腹腔注射秋水仙素;
2. 取材 打開(kāi)蟾蜍腹腔,截取1-2cm長(zhǎng)的一段小腸(以十二直腸為好),用見(jiàn)到剖開(kāi)成片狀,在生理鹽水中洗凈;
3. 低滲 將洗凈的小腸投入到盛有5mL低滲液的小試管中,在37℃水浴下處理30分鐘以上;
4. 固定 棄去低滲液,加入新配制的甲醇(3):冰乙酸(1)固定液約5ml,靜止固定40分鐘左右;
5. 解離 棄去固定液,加入約2ml60%的冰乙酸,輕輕搖動(dòng),使解離的細(xì)胞充分散開(kāi),5分鐘后棄去小腸,即得細(xì)胞懸浮液;
6. 滴片 吸取少許細(xì)胞懸浮液,在適當(dāng)?shù)母叨鹊?-4滴于冰冷的載片上,迅速吹斜氣;
7. 干燥 滴片自然風(fēng)干或吹風(fēng)機(jī)吹干;
8. 染色 在載片上滴十滴磷酸緩沖液,再滴一滴Giemsa染液,橡皮球輕輕吹均勻,染色30分鐘左右;
9. 觀察 吹干后在顯微鏡下觀察。
五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告
1. 簡(jiǎn)述染色體標(biāo)本制備的方法步驟
2. 制備理想的染色體標(biāo)本,應(yīng)注意哪些關(guān)鍵步驟?

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