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上海士鋒生物科技有限公司
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士鋒生物植物芳香物質的提取分離及測定

時間:2014-3-20閱讀:952
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芳香物質是具揮發性的、能夠產生一定氣味的含香物質的總稱,它是構成和影響果品鮮食、加工質量的主要因素。到目前為止,已從杏果實中鑒定出100多種芳香物質。芳香物質分析一般要經過芳香物質的提取、純化、濃縮、氣相色譜分離并配合質譜定性定量。為了得到較全面的分析,往往需要同時使用幾種提取方法。
加熱果汁,使之在100℃以下沸騰,產生二次蒸汽,夾帶芳香物質從果汁中分離出來,然后用有機溶劑從中回收揮發性物質,揮發性物質在溶劑相和蒸餾液之間的分配系數不同,通過溶劑的選擇,排除那些不重要或干擾分析的化合物,有選擇性的提取芳香物質。同時蒸餾萃取法是蒸餾提取和溶劑提取的合并,同時加熱果汁和溶劑,兩種蒸汽混在一起后完成萃取工作。它吸收了二者的優點,并且只需少量的溶劑就可有效地提取大量樣品中的揮發性成分。經提取、純化、濃縮的精油,采用氣相色譜-質譜-計算機聯用技術進行分離鑒定。通過檢索譜圖庫,并結合標準質譜圖,確認化學成分;運用峰面積歸一化法或內標法,求得了各化學成分的含量。
本實驗以杏果實為試材,學習芳香物質的提取分離及測定方法。
一、試材及用具
1.試材 杏果實
2.儀器 氣相色譜-質譜-計算機聯用儀(agilent 6890N-5973N型)、KD濃縮器、同時蒸餾萃取裝置(SDE)、電熱恒溫水浴鍋、套式恒溫加熱裝置等。
3.試劑 二氯甲烷、無水硫酸鈉(AR)、3-壬酮等。
二、方法步驟
1.果實芳香物質的提取
采用同時蒸餾萃取法,裝置見下圖。A瓶中裝有樣品和蒸餾水,B瓶中裝有二氯甲烷或其他有機溶劑,兩部分加熱后,各自的蒸汽在裝置的頂部混合,并通過冷凝管冷卻,在EF段分層,有機層從D端返回B瓶,水層從C端返回A瓶,這樣便完成了整個萃取過程。如此連續進行,使樣品中的揮發性有機物萃取濃縮。
稱取杏果肉500g,打漿后置于3L圓底燒瓶中,加入內標物3-壬酮(zui終濃度為0.7ppm),加入1L蒸餾水;于250mL圓底燒瓶中加二氯甲烷60mL。將SDE裝置安裝好,樣品液用套式恒溫器加熱,保持微沸狀態,二氯甲烷于55℃水浴中加熱,連續蒸餾萃取3h。二氯甲烷萃取液中加無水硫酸鈉5g,脫水干燥一晝夜,過濾。濾液于50℃濃縮,回收二氯甲烷,濃縮至0.2~0.4mL,得到芳香物質濃縮液。待氣相色譜-質譜測定。
2.氣相色譜-質譜測定
(1)氣相色譜條件 色譜柱:HP-5彈性石英毛細管柱25m×0.25mm×0.1μm; 柱溫40℃(2℃/min)-250℃保持40 min;汽化室溫度270℃;進樣量0.2μL;載氣He流量1mL/min;分流比100:1。
(2)質譜條件 gc-ms接口溫度280℃,EI離子源;離子源溫度230℃;電子能量70ev;質量范圍29~600amu。

3.芳香物質的定性與定量
(1)定性分析
芳香物質組分分離大多數采用氣相色譜法,不同組分形成其各自的色譜峰,按照色譜峰的保留值來定性。芳香物質成分的鑒定可用紅外光譜、紫外光譜、毛細管色-質譜聯用、核磁共振等方法。目前zui廣泛的采用色-質譜聯用法。
取芳香物質提取物0.2μL,用氣相色譜-質譜-計算機聯用儀進行分析鑒定。通過G1701CA化學工作站數據處理系統,檢索Nist98/Wiley圖譜,再結合有關文獻進行人工譜圖解析,確認芳香物質的各個化學成分。
(2)定量分析
a.歸一化法 歸一化法應用時,必須將樣品的全部組分餾出,并都能產生相應信號。
計算公式為:
Pi % = mi /(m)×100% = Aif ′i / (A1f 1′1+A2f 2′2+…+Anf n′)×100%
式中:Pi—i組分的百分含量
mi—被測組分i的量;
m—被測物試樣的總重量;
Ai—i組分峰面積;
f ′i—相對校正因子
相對校正因子f ′i,即為物質i和標準物質S的校正因子(fi /fs)之比,其定義:是被測物質單位峰面積所相當物質的量是標準物質單位峰面積相當標準物質量的幾倍。f′i可由文獻中查得,也可以測得,測定方法:先準確稱量標準物質和被測物,然后混合均勻進樣,測出它們的峰面積,按下式計算。
f ′i = fi / fs = (mi / Ai) / (MS / As)
通過G1701CA化學工作站數據處理系統,按面積歸一化法進行定量分析,求得各化學成分在揮發油中的相對百分含量。
b.內標法 將各標準純品配制成系列濃度梯度,加3-壬酮1.0μL做內標,用二氯甲烷定容至10mL,然后以各標準純品與內標的峰面積之比值對相應標準物質的含量作標準曲線。
根據各標準純品各自的標準曲線,按以下公式計算實際試樣中芳香物質含量(ppb)
芳香物質含量(ppb)=C×V / (M×L)×100
式中:C—從標準曲線上查得的含量(μg)
V—芳香物質量(mL)
M—試樣量(g)
L—進樣量(μL)

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