細(xì)胞：H522細(xì)胞

中文名稱(chēng)：人肺腺癌細(xì)胞

生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞

培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（ 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作）

1． 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min）

2． 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ粢萠酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。

3． 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4． 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液（每周 2-3 次），待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢(xún)細(xì)胞庫(kù)管理員，以細(xì)胞庫(kù)管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢(xún)細(xì)胞庫(kù)管理員，避免不必要的損失；）

利用試管嬰兒中被遺棄的胚胎來(lái)產(chǎn)生正常的干細(xì)胞系，在胚胎發(fā)育到5—6天后，就能從中收集到一團(tuán)特殊的細(xì)胞—內(nèi)細(xì)胞團(tuán)。

然后在培養(yǎng)皿中經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，這些內(nèi)細(xì)胞團(tuán)能發(fā)育成胚胎干細(xì)胞系，在合適的條件下這些胚胎可以再生成新的干細(xì)胞，也可以分化成心臟細(xì)胞、肝臟細(xì)胞、腦細(xì)胞等不同的細(xì)胞類(lèi)型。

在這種干細(xì)胞形成的過(guò)程中科學(xué)家面臨的最大問(wèn)題是，已形成的干細(xì)胞系可能發(fā)生變異，必須不斷合成新的干細(xì)胞系。

而克隆干細(xì)胞的過(guò)程比獲取正常胚胎干細(xì)胞更加復(fù)雜，難度也更大?？茖W(xué)家一般從皮膚細(xì)胞等成人細(xì)胞中提取DNA，然后將提取的DNA注入事先移去DNA的卵細(xì)胞中，于是卵細(xì)胞開(kāi)始像正常胚胎那樣分裂，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的發(fā)育，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)形成，再利用內(nèi)細(xì)胞團(tuán)培養(yǎng)出干細(xì)胞。

已經(jīng)成功地利用克隆的老鼠胚胎獲得干細(xì)胞，但在人類(lèi)實(shí)驗(yàn)中并沒(méi)有獲得成功。與自然受精的胚胎不同，克隆胚胎很難存活一個(gè)星期即5—6天左右，而只有活這么長(zhǎng)時(shí)間的胚胎才能形成干細(xì)胞所需的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)。 

了解克隆過(guò)程后，我們就會(huì)知道并不是每個(gè)卵細(xì)胞都能成功地克隆出干細(xì)胞，因此存在一個(gè)成功率的問(wèn)題，而科學(xué)家們所追求的就是利用最少的卵細(xì)胞克隆出最多的干細(xì)胞系；