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體細胞胚誘導

時間:2013/7/4閱讀:1504
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 體細胞胚誘導

 
1. 實驗材料: 胡蘿卜種子。
2. 培養基
2.1 胚性愈傷組織誘導培養基
MS無機鹽附加:煙酸0.05mgL-1、VB6和VB1各0.01mgL-1、甘氨酸3mgL-1、肌醇100mgL-1、激動素0.2mgL-1、2,4—D 0.1mgL-1、蔗糖20gL-1、瓊脂2-5gL-1,pH5.8。
2.2 體細胞胚形成培養基
MS無機鹽附加:煙酸0.05mgL-1、VB6和VB1各0.01mgL-1、甘氨酸3mgL-1、肌醇100mgL-1、激動素0.2mgL-1、蔗糖20gL-1,pH5.8。
3. 實驗過程
a. 煙草種子以10%次氯酸鈣溶液表面消毒15min,用無菌蒸餾水洗3次,置于培養皿內無菌的濕潤濾紙上,在25℃下于暗處萌發;
b. 取7日齡幼苗切取下胚軸部位長1cm,單個地置于胚性愈傷組織誘導培養基上,接種好的材料置于25℃溫度下黑暗培養4-6周;
c. 將愈傷組織小塊轉移到與原來成分相同的新鮮培養基上,一半置于于25℃下照光培養,另一半繼續在黑暗條件下培養,若以類似方式每4周繼代1次,可對組織進行繁殖;
d. 誘導體細胞胚胎發生:將在光照下繼代培養的愈傷組織塊轉移到不含2,4—D的培養基中培養,3~4周后,將出現大量的各處在不同的發育階段的體細胞胚。
e. 觀察體細胞胚的發育過程,統計每個愈傷組織形成的體細胞胚數,統計不同發育時期的體細胞胚占胚總數的比例,分析培養中體細胞胚形成的時間、控制其一致性可能采取得調控措施。

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