一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/div>
1．掌握酵母細(xì)胞的培養(yǎng)方法
2．學(xué)會(huì)使用相差和微分干涉顯微鏡
二、異源互補(bǔ)技術(shù)概述
釀酒（芽殖）酵母的培養(yǎng)在許多方面可以與大腸桿菌相比較。這種酵母可以用標(biāo)準(zhǔn)的微生物學(xué)技術(shù)在液體和固體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。大多數(shù)酵母菌株在復(fù)合液體培養(yǎng)基中的倍增時(shí)間為90～120min，到靜止期時(shí)細(xì)胞滴度為3×108到5×108細(xì)胞/mL。單個(gè)細(xì)胞在復(fù)合固體培養(yǎng)基上經(jīng)過36 hr可長成1～2mm的單菌落，在合成的有限培養(yǎng)基中生長較慢，倍增時(shí)間至少增加為原來的兩倍，且細(xì)胞的zui終滴度僅達(dá)到2×107到3×107細(xì)胞/mL。在有限培養(yǎng)基平板上菌落需大約60 hr才能長成容易計(jì)數(shù)的大小。在復(fù)合或有限培養(yǎng)基上生長的菌落能影印培養(yǎng)或轉(zhuǎn)移到膜上，進(jìn)行分子水平的分析。
非洲粟酒裂殖酵母和其近親釀酒酵母一樣，是一種子囊真菌，但它與發(fā)芽酵母的關(guān)系并不密切，兩種酵母的蛋白質(zhì)序列和基因同源性在60﹪到90﹪。與釀酒酵母相比，非洲粟酒裂殖酵母通常是單倍體細(xì)胞，可分為兩種交配型，在饑餓情況下不同的交配型單倍體進(jìn)行交配，形成雜合的雙倍體合子。雙倍體合子經(jīng)過減數(shù)分裂形成4個(gè)孢子，由孢子發(fā)芽而長成單倍體菌落。非洲粟酒裂殖酵母具有典型的真核生物的細(xì)胞周期，包括G1、S、G2和M 四個(gè)時(shí)期。在基本或復(fù)合培養(yǎng)基中其世代時(shí)間為2到4個(gè)h，其中G2期占細(xì)胞周期的70﹪，其它期各占10﹪。
三、 傳代細(xì)胞培養(yǎng)與觀察材料、試劑和儀器
1． 材料
釀酒芽殖酵母（Saccharomyces cerevisiae）和非洲粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces kephir）。
2． 試劑
1）釀酒芽殖酵母的培養(yǎng)基
（1）YPD（YPED）液體培養(yǎng)基（用于酵母菌搖培，100mL）
細(xì)菌培養(yǎng)用蛋白胨（Bacto-peptone） 2g
細(xì)菌培養(yǎng)用酵母提取物 （Bacto-Yeast extract） 1g
葡萄糖（Glucose，配成40%detrose貯液單獨(dú)滅菌,4℃保存） 2g
加ddH2O至90mL，調(diào)pH值至4-5，定容至95mL，高溫滅菌（121℃,15min）。待溫度降至55℃時(shí)，加入5mL預(yù)熱（至少室溫放置30min）無菌的40％detrose貯液。
（2）YPD（YPED）固體培養(yǎng)基（可用于保菌或培養(yǎng)，100mL）
在YPD液體培養(yǎng)基的營養(yǎng)物中加入2g瓊脂粉，加ddH2O至90mL，調(diào)pH值至5.8，定容至95mL，高溫滅菌（121℃, 15min）。待溫度降至55℃時(shí)，加入5mL預(yù)熱（至少室溫放置30min）無菌的40％ detrose貯液。
（3）YPAD（斜面）培養(yǎng)基（可用于保菌或培養(yǎng)營養(yǎng)缺陷菌株，100mL）
在YPD液體培養(yǎng)基中加入硫酸腺嘌呤（Adenine hemisulfate salt，腺嘌呤半硫酸鹽）40mg，瓊脂（Bacto-agar）（液體培養(yǎng)基不加）2g。加ddH2O至90mL，調(diào)pH值至5.8（液體調(diào)至4左右），定容至95mL，高溫滅菌（121℃,15min）。待溫度降至55℃時(shí)，加入5mL預(yù)熱（至少室溫放置30min）無菌的40％detrose貯液。分裝培養(yǎng)基，傾斜放置形成斜面，每支試管依大小可加入3-5mL培養(yǎng)基。（若葡萄糖直接加入培養(yǎng)基則可先分裝至試管后滅菌（需要棉塞），滅菌會(huì)造成葡萄糖碳化，培養(yǎng)基略變褐色，對酵母培養(yǎng)會(huì)略有影響）。該培養(yǎng)基用于4-6個(gè)月的短暫保菌或酵母培養(yǎng)。
2 傳代細(xì)胞培養(yǎng)與觀察）非洲粟酒裂殖酵母的培養(yǎng)基
（1）YE培養(yǎng)基（100mL）
酵母提取物 0.5g
葡萄糖（Glucose，配成40%detrose貯液單獨(dú)滅菌，4℃保存） 2g
細(xì)菌培養(yǎng)用瓊脂（Bacto-agar） 2g
加ddH2O至90mL，調(diào)pH值至5-6，定容至95mL，高溫滅菌（121℃,15min）。待溫度降至55℃時(shí)，加入5mL預(yù)熱（至少室溫放置30min）無菌的40％detrose貯液。
