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免疫組織化學染色方法

閱讀:676發布時間:2015-7-9

免疫組織化學染色方法
    1、按標記物質的種類,如熒光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等,可分為免疫熒光法、放射免疫法、酶標法和免疫金銀法等。
    2、按染色步驟可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步、三步或多步法);與直接法相比,間接法的靈敏度提高了許多。
    3、按結合方式可分為抗原—抗體結合,如過氧化物酶-抗過氧化物酶(PAP)法和親和連接,如卵白素-*-過氧化物酶復合物(ABC)法、鏈霉菌抗*蛋白-過氧化物酶連結(SP)法等,其中SP法是zui常用的方法。抗病毒活性測定法:檢測樣品中干擾素的含量zui常用的方法是檢測其抗病毒活性,其檢測原理是用細胞因子樣品處理易感細胞,使細胞建立抗病毒狀態,然后用適量病毒攻擊細胞,評價病毒的復制量或病毒引起細胞病變的程度即可判斷樣品中細胞因子的生物活性。
    常用于檢測抗病毒活性的細胞株有WISH,Hep2/c,L929,A549和MDBK等。其中WISH和Hep2/c細胞株用以檢測人干擾素,L929細胞株用于檢測小鼠干擾素,Ratec細胞株用于檢測大鼠干擾素,而MDBK細胞株則可用于檢測多種族的IFN-α和IFN-γ。常用于攻擊細胞的病毒有濾泡性口炎病毒(VSV)、鼠腦心肌炎病毒(EMCV)以及Sindbis virus等病毒。
    檢測抗病毒活性包括測定細胞因子抑制病毒的致細胞病變效應(CPE)、抑制病毒蝕斑形成或抑制病毒的產量等。 IFN的抗病毒活性通常以每毫升樣品中所含的單位數(U/ml)表達,IFN的純度則以每毫克蛋白質中所含的單位數(U/mg)或IFN的量(μg/mg)表達。IFN抗病毒活性單位的定義是指能抑制50%細胞病變或50%病毒空斑形成效應的IFNzui高稀釋度的倒數。


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