為了提高ELISA的敏感性,在小鼠ELISA試劑盒中人們采用不同的放大機制,建立在小鼠ELISA試劑盒的幾類放大系統.現在向讀者介紹幾個比較重要的小鼠ELISA試劑盒放大系統.
一,生物-親和素系統(Biotin-Avidin System,簡稱BAS)
*與抗*之間具有*的親和力,可以縮短反應時間,達到快速檢測的目的.另外,抗體和酶的*標記率高,又不影響其活性,每個親和素分子能結合4個*,每個*能標記大量酶分子,使得ELISA的敏感性大大提高,*與親和素的結合也極為穩定,不會在洗滌過程中脫落.BA-ELISA是在常規ELISA的基礎上,結全*(Biotin)與親和素(Avidin)的高度放大作用,形成的一種檢測方法.BA-小鼠ELISA試劑盒分為:
1,LAB法即酶聯親和素-*標記法(Labeled avidin-biotin,簡稱LAB).用辣根過氧化物酶直接標記親和素,用*標記第二抗體.
2,ABC法即酶聯親和素-*-過氧化物酶復合物法(Avidin-Biotin-Peroxidase Complex,簡稱ABC).如用鏈霉親和素(Streptavidin),則形成鏈霉親和素-酶聯*復合物(Streptavidin-Biotin-Peroxidaes Complex,簡稱SABC).在ABC法中,用*標記第二抗體,又用*標記過氧化物酶.在使用前30min,親和素與酶聯*以1:1的比例混勻.1個親和素分子結合3個*分子,親和素剩下的1個結合點與標記第二抗體的*結合,親和素起橋聯作用.ABC法比PAP(Peroxidase-antiperoxidase tech-nique)法敏感幾十倍.
3,BAB法即酶聯親和素-*橋法(Bridged avidin-biotin,簡稱BAB).用游離親和素(或鏈霉親和素)作為橋聯劑,將*標記后開成的復合物與酶標記*連結起來,然后進行樣品的檢測.由于標記抗體分子上連有多個*,因此,zui終形成的抗原-*標記抗體-親和素-酶標*復合物可積聚大量的酶分子;加入相應底物后,產生強烈的酶促反應,大幅度提高檢測的靈敏度.
