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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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閱讀:373發(fā)布時(shí)間:2015-3-16
ELISA在評(píng)估線粒體功能時(shí),常常要用到監(jiān)控線粒體膜電位的探針,就是大家常常提到的JC-1、Rhodamine 123等。然而,在使用過程中,還需要仔細(xì)考慮多個(gè)控制,以及非質(zhì)子電荷對(duì)染料行為的影響,才能正確地闡釋結(jié)果。為此,美國羅徹斯特大學(xué)醫(yī)學(xué)及牙醫(yī)學(xué)院的研究人員撰寫了一篇使用指南,討論了實(shí)驗(yàn)過程中一些重要的技術(shù)考慮、控制以及平行互補(bǔ)分析。文章發(fā)表在一期的《BioTechniques》上。
近年來,測(cè)量線粒體膜電位的熒光染料已成為常用的工具,來監(jiān)測(cè)重要的線粒體參數(shù)的改變。線粒體膜電位本身是細(xì)胞健康或受損的重要指示劑。而這些染料一般是親脂性陽離子化合物,它們?cè)诰€粒體膜基質(zhì)空間中積累,呈反比。
測(cè)量線粒體膜電位的染料有很多種,包括TMRM、TMRE、Rhodamine 123、DiOC6(3)、JC-1等,每一種都有其優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)。ELISA作者在文章中就介紹了常用染料的優(yōu)勢(shì)以及潛在的困難,并強(qiáng)調(diào)了在生命科學(xué)研究中突出其有效應(yīng)用的*方法。
對(duì)于如何計(jì)劃實(shí)驗(yàn),作者也給出了具體的建議。ELISA通常有兩種類型的實(shí)驗(yàn):*種,在細(xì)胞或組織的慢性處理之后,ELISA研究人員希望確定如何改變;第二種,研究人員希望監(jiān)測(cè)急性處理相對(duì)應(yīng)的Δψm變化。盡管乍一看,第二種方法似乎更為困難,但實(shí)際上每個(gè)樣品/條件都能充當(dāng)急性處理前的基線或內(nèi)對(duì)照,因此通常能提供更容易闡釋的結(jié)果。作者還詳細(xì)討論了兩種方法的考慮因素。
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