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ELISA試劑盒產生的反應

閱讀:264發布時間:2015-4-13

DH2+H202 HRP D+2H2O
上式中DH2為供氫體(即底物),H2O2為受氫體。HRP對受氫體的專一性很高,除H2O2外,僅作用于小分子醇和尿素的過氧化物。HRP的底物有多種,在ELISA試劑盒中常用的有:鄰苯二胺(orthophenylenediamine,OPD),四甲基聯苯胺(3,3,5,5-tetramethyl-benzidine,TMB)和2,2,-連氮基-雙-3-乙基苯噻唑啉磺酸鹽[2,2,-azino-bisc(3-ethyl-benzthiazolinesulfonate-6),ABTS]。三者各有優缺點:OPD是在ELISA中應用zui多的底物,靈敏度高,比色方便,但配成溶液后穩定性差,且有致異變性;TMB經酶作用后由五色變藍色,加酸終止反應后顯黃色,目測對比鮮明,可比色定量,溶液的穩定性也較差,但無致異變性,ELISA試劑盒因此應用日見增多;ABTS雖然靈敏度不如OPD和TMB,但空白值很低。
(2)ALP:是一種磷酸酯的水解酶,用做示蹤酶的ALP活性應在l 000U/mg以上。ALP常用的底物為對硝基苯磷酸鹽(PNP),降解產物為黃色的對硝基酚。經NaOH終止酶反應后,顏色維持比較穩定。
在ELISA中酶作用于底物后生成有色物質、熒光物質或導致化學發光,分別可用分光光度計、熒光光度計測量及照度計測量。熒光和化學發光測定的敏感度均高于比色測定,ELISA試劑盒標準曲線的線性范圍亦較比色反應寬,測定效果優于常用的比色ELISA。

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