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技術文章

斑點免疫金銀色法檢測牛結核血清抗體程序

閱讀：509發布時間：2014-2-12

斑點免疫金銀色法檢測牛結核血清抗體正式試驗程序
（1）點樣 以打孔器將微孔濾膜制成直徑3mm的膜片。將牛結核PPD用0.01Mol/LpH9.0PBS液稀釋為40μg/ml，用微量加樣器加1μl抗原于膜片*，37℃烘干10min。
（2）封閉 將膜片置于0.01Mol/L pH7.4含0.2％BSA的PBST液中，37℃作用45min，其間振蕩數次。取出后以蒸餾水洗滌1次，用濾紙吸干。
（3）加待檢血清 待檢血清以PBST液做1︰160倍稀釋。將膜片浸入其中，37℃作用1h，其間振蕩數次。取出后，以PBST液洗滌后，濾紙吸干。此步同時設標準陽性血清和陰性血清對照。
（4）加金標抗體 以PBST液將金標液作1︰10稀釋，將膜片浸入其中，37℃作用2h，中間振蕩數次。
（5）銀染 將膜片從金標液中取出，于去離子水洗滌3次，每次3min。然后將膜片浸入暗室中的銀染色液中，室溫下作用10min，移入定影液中，室溫作用5min。然后用去離子水沖洗，自然干燥后觀察結果。

 


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