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體外細胞的凍存和復蘇說明

閱讀：474發布時間：2014-3-26

體外細胞凍存：

　　1.吸取傳代后的細胞懸液，離心，去除培養液，加入凍存液，分裝凍存管（凍存管內細胞數目一般為（5～10）×106個/ml，2ml凍存管中一般放1～1.5ml細胞）。

　　2.按步凍存

　　冷凍保存方法一：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。

　　冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之程序降溫機中每分鐘降1～3℃至-80℃以下，再放入液氮長期保存。

 

體外細胞復蘇：

     1.取出冷凍管，立即放入37℃水浴箱中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化，移入無菌操作臺內。

　　2.打開凍存管，將細胞懸液吸到離心管中。

　　3.1000rpm離心10分鐘，棄去上清液。

　　4.加適當培養液后將細胞轉移至培養瓶中，37℃培養，第二天觀察生長情況。


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