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上海滬震實業有限公司

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技術文章

閱讀：421發布時間：2015-4-23

對于培養細胞樣品：

1. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。

2. 對于貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍（如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗）。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。

對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。

3. 充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入150微升裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200微升或250微升。

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