固氮螺菌培養(yǎng)基特殊培養(yǎng)法
二倍體細(xì)胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關(guān)鍵在于傳代，其傳代程序?yàn)椋?/span>
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以僅覆蓋細(xì)胞層即可；作用1~5分鐘。
4.待細(xì)胞附著松動、細(xì)胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細(xì)胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。
5.輕輕反復(fù)吹打制成單個細(xì)胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細(xì)胞(Feeder Cells)。制備方法：
1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細(xì)胞，90%匯合時制成細(xì)胞懸液，再按105細(xì)胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細(xì)胞半?yún)R合時，準(zhǔn)備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細(xì)胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。
3.細(xì)胞經(jīng)上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時，*消化細(xì)胞制成懸液，按5×104（104細(xì)胞/cm2）接種入新固氮螺菌培養(yǎng)基中。
4.48小時后，即可用于細(xì)胞克隆之用。
細(xì)胞分離（克隆）培養(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細(xì)胞克隆法：
1.消化：取健康待克隆細(xì)胞，吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液，加消化液。
2.低密度細(xì)胞懸液的制備：做克隆細(xì)胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細(xì)胞懸液，然后稀釋細(xì)胞，使之成為1~2細(xì)胞/毫升懸液，zui適宜細(xì)胞密度為1~2細(xì)胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種：先用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準(zhǔn)確，爭取在zui短時間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標(biāo)記：培養(yǎng)6~12小時后，待細(xì)胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺上，觀察和標(biāo)記下含有單個細(xì)胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液，只有在細(xì)胞增長過于緩慢時才可進(jìn)行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過多，余少許，以免細(xì)胞干涸。然后再迅速補(bǔ)加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細(xì)胞增至500~600個時，可進(jìn)行分離培養(yǎng)。
5.分離擴(kuò)大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時后進(jìn)行觀察。挑選生長良好的單細(xì)胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細(xì)胞群即可，如過多，應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓時，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當(dāng)細(xì)胞離開底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補(bǔ)加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細(xì)胞群后，即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
相關(guān)產(chǎn)品如下：hz-1444 ScaBER（膀胱鱗癌細(xì)胞）
hz-1445 WISH（羊膜細(xì)胞）
hz-1446 H08910（卵巢癌細(xì)胞）
hz-1447 Bcap-37（乳腺癌細(xì)胞）
hz-1448 Hela(宮頸癌細(xì)胞）
hz-1449 PC-3（人前列腺癌細(xì)胞）
hz-1450 SGC7901（胃腺癌細(xì)胞）
hz-1451 786－0（腎透明細(xì)胞腺癌）
hz-1452 6T－CEM（T細(xì)胞白血病）
hz-1453 Jecket（淋巴瘤細(xì)胞）
hz-1454 JAR（胚絨毛癌細(xì)胞）
hz-1455 PC-12未分化（大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤）
hz-1456 WI-38（人二倍體胚肺細(xì)胞）
hz-1457 THP-1（人單核細(xì)胞）
hz-1458 T-24（膀胱變移細(xì)胞癌）
hz-1459 A375（人類惡性黑色素瘤）
hz-1460 CHRF（人巨核細(xì)胞白血病）
hz-1461 K562（慢性髓原白血病）
hz-1462 RD（惡性胚胎橫紋肌瘤）
hz-1463 CNE（鼻咽癌細(xì)胞）
hz-1464 RT4（膀胱癌細(xì)胞）
hz-1465 J82（膀胱癌細(xì)胞）
hz-1466 SHG44（膠質(zhì)瘤細(xì)胞）
hz-1467 LoVo（人結(jié)腸癌細(xì)胞）
hz-1468 V79(中國倉鼠肺細(xì)胞）
hz-1469 U937（組織細(xì)胞淋巴瘤）
hz-1470 PT-67（病毒轉(zhuǎn)染小鼠細(xì)胞）
hz-1471 HEL（紅白血病細(xì)胞）
hz-1472 293（轉(zhuǎn)染腺病毒E1A基因的人腎上皮細(xì)胞）
hz-1473 C6（腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞）
hz-1474 SHZ-88(大鼠乳腺癌細(xì)胞)
hz-1475 CBRH－7919（大鼠肝癌細(xì)胞）
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