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ELISA試劑盒試驗時怎么降低試驗背景

閱讀:246發布時間:2015-1-23

現在由于ELISA試劑盒檢測的方便,許多尋常百信也會購買ELISA試劑盒來做實驗,ELISA試劑盒的種類很多,有人elisa試劑盒、小鼠elisa試劑盒、大鼠elisa試劑盒等各種,不過在人們的心目中,目前還是進口ELISA試劑盒比國產ELISA試劑盒要好。不管是進口的還是國產的ELISA試劑盒,在實驗的時候,我們總是不可忽視實驗的背景影響,那么怎樣才能把試驗背景影響降低到zui低呢?要從以下幾個方面入手:
  1.洗滌:看似無聊的步驟,其實是實驗的重中之重,因為如果未結合的材料(如非特異結合的抗體或檢測試劑)殘留在微孔板中,那么它會增加背景噪音。如有必要,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會阻止非特異結合反應。如果背景過高,而您懷疑洗滌不夠時,可以嘗試增加洗滌次數。
  2.密封:封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的機會。您當然也希望抗體只與目的蛋白結合吧。如果您的背景過高,懷疑封閉不充分,那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當延長封閉時間。
  如果您一直被背景問題所困擾,那么也許您該花些時間來優化封閉液。這可能需要時間,但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素,包括微孔板的表面試劑、ELISA試劑盒吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結合,但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發生相互作用。
  3.抗體濃度: ELISA實驗我們通常會follow師兄師姐留下來的操作步驟,ELISA試劑盒但是如果試劑稍有不同,則可能需要優化抗體的量。記住,非特異的抗體結合會增加背景。為了防止這一點,切勿使用過多的一抗或二抗。
  4.檢測試劑:切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高,或者未正確稀釋,則會導致高背景。也不要顯色過度,如有必要,優化一下何時應加入終止液


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