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用什么樣的方法將ELISA與抗體結合起來

閱讀：312發布時間：2015-2-9

ELISA（1）不影響酶及抗體活性

（2）不產生干擾物質

（3）抗體和酶結合后應有較高的產量

（4）不出現非特異性反應

（5）   結合程序簡便

（6）來源易、價廉

目前常用的有戊二醛和過碘酸鈉二種。由于對所使用結合劑的針對性，因此標記的方法也有戊二醛交聯法和過碘酸鈉氧化法兩類。
1、戊二醛交聯法：戊二醛是一種能使蛋白質與蛋白質聯結zui常用的雙功能試劑。它有2個對稱的活性醛基，可分別與酶蛋白和免疫球蛋白上的游離氨基（酚基、味唑基、巰基）以共價鍵邊接起來而形成的酶結合物。

過碘酸鈉氧化法：本法是目前酶標記抗體較好的方法，能使70%酶與90%以上球蛋白結合。采用本法首先是用氟代二硝基苯（Fluoro dinitro bengene 2.4—硝基苯，FDNB）封閉HRP表面的游離氨基（亦可用甲醛或戊二醛來封閉），從而提高酶結合抗體球蛋白的能力，避免酶的自身交聯。然后用過碘酸鈉來氧化HRP表面結構的醣鏈部份（即低聚醣基團）使成醛基，使其直接與抗體球蛋白上的游離氨基形成共價鍵而結合。zui后用硼氫酸鈉還原，使HRP表面醛基能充分與抗體球蛋白上氨基進行反應，使之形成穩定的結合物。


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