抗原與淋巴細胞接觸ELISA試劑盒產生免疫反應的方式有多種:抗原可先與巨噬細胞作用，然后再傳遞給淋巴細胞，也可直接與淋巴細胞（包括T細胞和B細胞）作用，發生免疫反應。抗原物質刺激機體后，抗體的產生有一定的規律，即抗原進入機體后，首先經過一段潛伏期，然后抗體含量逐漸增多，達到高峰后，暫時維持一定的時間，以后抗體含量又逐步下降，完成初次反應的階段。當同樣的抗原第二次再刺激機體后，抗體含量上升速度比初次反應速度快，并且峰值也較前次為高，高峰持續時間也較長，形成再次反應階段。
如果在抗體含量為zui高時，一般情況就能得到價的抗血清，經過采血，如不注射同樣抗原，機體產生抗體的能力就會日漸下降，但是，如果動物休息相當長的時間，例如2－3個月后，再次注射同樣的少量抗原，ELISA試劑盒它的抗體含量會很快上升，能重新獲得價抗血清。機體的特異性免疫反應與抗體的形成直接相關，因此，注意在抗原刺激下影響機體產生抗體的因素尤為重要。
應特別注意選擇合適的動物。免疫有物動物，年齡、體重和性別均要考慮。作為免疫用的動物年齡太小，免疫系統發育還不健全，會影響抗體的形成；年齡太大因代謝機能衰弱，也會影響抗體的形成。因此，ELISA試劑盒對于實驗室常用的家兔選擇兔齡為9－24個月，體重為2－2.5kg,耳朵大，靜脈粗，無腳癬的健康雄性白兔。挑選合適的注射途徑和部位。抗原進入機體的途徑多種多樣，例如肌肉、皮內、皮下、淋巴結、靜脈、腳掌和腹腔內等。經常采用的有兩種途徑：一種肌肉注射，另一種是靜脈注射，如果兩種途徑交替使用，那么應先靜脈注射后肌肉注射，這樣有利于機體產生價的抗體。 對于某一途徑，例如，肌肉注射時，常在不同肌肉部位進行多點注射，免疫效果也較好。采用什么途徑注射，與抗原的性質有關，對于某些病毒例如蕪菁花葉病毒，由于在純化時加入了許多化學物質就不適宜靜脈注射。另外，為了防止動物的注射點發火，一般每個注射點的劑量不應大于0.5ml.為了使抗原在機體內慢慢釋放出來，延長抗原在機體內的停留時間，從而使產生抗體的初次反應和再次反應結合在一起，常常在抗原中加入佐劑，并與抗原充分混合，一起注入動物體內。
