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技術文章

酶聯免疫使用試劑盒樣本前處理注意事項

閱讀:1342          發布時間:2015-5-13

ELISA試劑盒樣本前處理注意事項
3.1 均質
組織樣本:肉、肝食品類切細,用絞肉機反復絞碎,混合均勻。
水產樣本:去除樣品的非食用部分,食用部分切細,用均質器均漿;原料表面較臟時,需適當用蒸餾水清洗。
蛋類:鮮蛋去殼,蛋黃和蛋白充分混勻。
水果、蔬菜類:先用水洗去泥沙,然后除去表面的水分,取食用部分。
3.2 振蕩提取
 將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中,振蕩,使提取溶劑與容器內的樣品充分接觸以深入到樣本組織內部,提取待測組分。
3.2.1振蕩方式:振蕩器上進行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。
3.2.2 在組織樣本中加入有機溶劑之間提取時,應邊加邊振蕩,防止組織凝結成團,不利于提取。
3.3. 在用有機溶劑提取過程中,如果出現乳化現象,解決的方法有:①用細頭輕輕的攪拌,破壞乳化后,再重復離心。②再加入適量的提取劑,重新振蕩。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數不變。
3.4 濃縮
    由于凈化過程中引入的溶劑,可能會降低待測組分的濃度或者不適宜直接分析,需要去除全部有機溶劑。即ELISA試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮氣下吹干,再用復溶液溶解干燥殘留物。
濃縮方式:
    氮氣吹干除雜、壓縮空氣吹干除雜。
注意:
3.4.1在吹干樣本之前,用甲醇清洗針頭,防止雜質干擾。
3.4.2在吹樣本時,針頭應在液面上空,避免與樣本接觸,防止產生交叉污染。
3.4.3樣本吹干后應立即取下,避免吹的時間過長,影響zui終檢測結果。
3.4.4不同的藥物,吹干后樣本的保質期不同,提倡待樣本回到室溫后立即復溶。
3.5 凈化
    經過提取的待測組分中通常含有一些會干擾ELISA試劑盒中抗原抗體反應的雜質或者是含有與待測物結構相似的雜質。將待測組分與雜質分離的過程,我們稱為試劑盒中樣本的凈化。在我們現有的試劑盒前處理方法中涉及到的zui常見的凈化是:液液分配法。
 比如:用復溶液溶解干燥殘留物之前先加入適量的正己烷,在加入正己烷和復溶液渦動后如果出現乳化現象,可以60℃水浴加熱,至乳化現象消失或減弱后,加大離心轉速進行離心。

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