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ChIP技術(shù)的應(yīng)用
閱讀：1334 發(fā)布時(shí)間：2015-7-6ChIP技術(shù)的應(yīng)用
染色質(zhì)免疫沉淀的DNA適用于多種分析方法。如果目的蛋白的靶序列是已知的或需要驗(yàn)證的，可采用狹縫雜交（Slot blot）的方法，把靶序列特異性探針與染色質(zhì)免疫沉淀的DNA雜交，來驗(yàn)證目的蛋白與DNA靶序列的特異性結(jié)合。還可以根據(jù)靶序列設(shè)計(jì)引物，用半定量PCR的方法進(jìn)行測定，或采用Real-time PCR方法進(jìn)行定量分析。如果目的蛋白的靶序列是未知的或高通量的（high-throughput），可采用Southern雜交。但因?yàn)槊庖叱恋淼腄NA量較少，所以在研究時(shí)通常要用PCR方法擴(kuò)增DNA探針，再進(jìn)行整個基因組掃描。還可以把沉淀的DNA克隆到載體中，進(jìn)行測序，尋找該序列附近的開放閱讀框，發(fā)現(xiàn)新的基因調(diào)節(jié)序列。
目前，隨著人類基因組測序工作的基本完成，研究目的蛋白和整個基因組的相互作用逐漸成為研究的熱點(diǎn)。由于基因組中的信息量非常大，上述常規(guī)方法通常無法滿足科研的需要。近年來發(fā)展起來的ChIP-chip技術(shù)將基因組DNA芯片（chip）技術(shù)與染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（ChIP）相結(jié)合，為研究目的蛋白與整個基因組相互作用提供了可能。ChIP-chip 技術(shù)通過標(biāo)記染色質(zhì)免疫沉淀富集的DN***段，和另一個被標(biāo)記不同探針的對照組樣品一起，與DNA芯片雜交，再利用各種生物信息學(xué)方法對收集到的信號進(jìn)行分析，具體的實(shí)驗(yàn)步驟請參考Dr. Richard Young在Nature Protocols上的文章。ChIP-chip技術(shù)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于研究轉(zhuǎn)錄因子在整個基因組中的信號網(wǎng)絡(luò)，染色質(zhì)修飾機(jī)制在基因組中的調(diào)控，DNA的復(fù)制，修復(fù)以及修飾，基因的轉(zhuǎn)錄與核運(yùn)輸?shù)戎T多方面。
染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)還可用于分析兩種蛋白共同結(jié)合的DNA序列，即ChIP reChIP方法。ChIP reChIP是在*次ChIP的基礎(chǔ)上不解交聯(lián)，而繼續(xù)進(jìn)行另一個目的蛋白的免疫沉淀，從而得到與兩種目的蛋白都結(jié)合的DNA序列。值得注意的是，因?yàn)橥ㄟ^兩次免疫沉淀富集的DNA量比較少，所以在分析時(shí)通常要把多次免疫沉淀的DNA濃縮后再進(jìn)行操作。
隨著染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)受到廣泛的關(guān)注，運(yùn)用該技術(shù)發(fā)表的文章也逐漸增多，大家越來越多的開始關(guān)注如何改進(jìn)ChIP的方法。Millipore推出的Magna ChIP試劑盒，利用磁珠分離DNA-蛋白-抗體復(fù)合物，提高了ChIP的效率，簡化了操作的過程，縮短了實(shí)驗(yàn)的時(shí)間，還為同時(shí)進(jìn)行多個目的蛋白的研究提供了可能，是經(jīng)常使用ChIP技術(shù)的研究人員的理想選擇。
近年來ChIP技術(shù)也被用于研究RNA-蛋白的相互作用，其原理與DNA類似，也包括甲醛固定，超聲波破細(xì)胞，免疫沉淀，交聯(lián)逆轉(zhuǎn)，RNA純化和RNA鑒定等步驟。所不同的是，交聯(lián)逆轉(zhuǎn)只用Proteinase K，要進(jìn)行RNA純化和不含RNase的DNase處理，分析時(shí)用RT-PCR，芯片雜交要用cDNA芯片等。