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檢測藥物對細胞增殖能力的影響
閱讀：1488 發(fā)布時間：2015-11-13(一)試驗原理
細胞有絲分裂指數(mitotic index，MI)是指屬于分裂期的細胞占總細胞數的百分率．用于表示細胞增殖旺盛的程度，也可用于檢測藥物對細胞增殖能力的影響。用蓋玻片培養(yǎng)法培養(yǎng)細胞，做固定和染色后，鏡下觀察和計數1000個細胞中處于分裂期的細胞數并計算MI。
(二)材料
1．待檢材料(藥物)。
2．細胞培養(yǎng)成層的貼壁細胞。
3．試劑 甲醇、3％吉姆薩染液。
4．器材CO2培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、蓋玻片(2．2 cm×2．2 cm，需預先清洗和滅菌處理)、塑料培養(yǎng)皿(3．5 cm)、載玻片、封片用蓋玻片、中性樹膠。
(三)實驗方法
1．將細胞消化成單個細胞懸液，將細胞懸液分瓶培養(yǎng)，分成不加藥的對照組和加人不同劑量藥物的實驗組。
2．細胞傳代培養(yǎng)的方法培養(yǎng)細胞，并制成濃度為105／ml的細胞懸液。
3．將清洗和滅菌處理的蓋玻片放置在塑料培養(yǎng)皿中，將細胞懸液搖勻后接種于培養(yǎng)皿中，各皿中接種量相同。
4．分別于培養(yǎng)24 h、48ht和72h后從培養(yǎng)皿中取出蓋玻片，在Hanks液中漂洗2～3次。
5．先用甲醇固定30 min，再用吉姆薩染液染色。晾干后用中性樹膠封片。
6．油鏡下或高倍鏡下計數1000個細胞中處于分裂期的細胞數。
7．計算MI按下列公式計算MI。
(四)結果與分析
將對照組和藥物組的實驗結果繪制成直方圖并加以比較，也可繪制成MI曲線進行比較：
(五)注意事項
1．為了減少誤差，實驗者必須熟悉各期分裂象細胞的形態(tài)特征，該實驗自始至終由一人完成，當兩人以上觀察時，應掌握相同的標準。
2．MI曲線與細胞生長曲線趨勢基本相似，但不*相同。如果在細胞增長達飽和密壁并進入停止期后．細胞數量很多，而分裂象細胞可*消失。
3．細胞在蓋玻片上的密度常不均勻，細胞密集區(qū)與區(qū)的分裂象細胞數目可能不同。計數時要選擇密度近似區(qū)，以減少實驗誤差。