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鼠腹腔巨噬細胞制備
閱讀：1201 發布時間：2015-11-16人巨噬細胞可從外周血或經斑蝥激發的皮皰液中獲取，也可從肺灌洗液或患者腹膜透析液中分離，但操作煩瑣，得量不多。許多實驗室在進行基礎或配合臨床研究巨噬細胞功能及其與疾病的關系、或篩檢免疫增強藥物和探討其作用機制時，常選用小鼠腹腔巨噬細胞為研究對象。
(一)鼠腹腔巨噬細胞制備
1．用無菌注射器吸取3％硫代乙醇酸鈉3ml，注射于小鼠腹腔內。
2．四日后，注射羊紅細胞(1％懸液)lml于小鼠腹腔內。
3．注射1h后，將小鼠用頸椎脫臼法處死，解剖暴露腹腔，于腹腔靠上部位，用鑷子輕輕夾起腹膜，將腹膜剪一小口，用尖吸管注入5ml預溫的PBS，同時用手反復揉搓腹腔約1～2min，以便盡可能多地沖洗出小鼠腹腔的吞噬細胞
4．用尖吸管吸取腹腔液，置一潔凈試管內。
5．用尖吸管將腹腔液吹打均勻(盡量避免產生氣泡)，吸取一滴滴于載玻片上，加蓋玻片鏡檢。
(二)炭粒廓清試驗
正常小鼠肝中庫普弗細胞可吞噬清除90％炭粒，脾巨噬細胞約吞噬清除10％炭粒，據此給小鼠定量靜脈注射印度墨汁(炭粒懸液)，間隔一定時間反復取靜脈血。測定血中炭粒的濃度，根據血流中炭粒被廓清的速度，判斷巨噬細胞的功能。
(三)吞噬功能的檢測
1．雞紅細胞(CRBC)懸液的制備取雞血l～2ml，阿氏液抗凝。試驗前用無菌生理鹽水沖洗3次，然后配成5％CRBC懸液。
2．吞噬試驗取皮皰滲出液O．5ml，加上述CRBC懸液0．01 ml混勻，置37℃水浴中30min，每隔10min輕輕搖動1次。1000r／mln離心5min，棄上清液。留少許液體將細胞充分混勻．涂片，甲醇固定，吉姆薩染色，油鏡下觀察并計數100～200個巨噬細胞。
3．結果觀察
(1)吞噬細胞百分率：即100個巨噬細胞中吞噬有CRBC的細胞數。
(2)吞噬指數：將100個巨噬細胞所吞噬的CRBC的總和除以100，所得每個巨噬細胞吞噬CRBC的平均數，即吞噬指數。