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DiI（細(xì)胞膜紅色熒光探針）10mg說明書

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詳細(xì)介紹

DiI( 細(xì)胞膜紅色熒光探針 )10mg說明書實(shí)驗(yàn)要點(diǎn) ：

1．CTAB 溶液在低于15℃時(shí)會(huì)析出沉淀，因此在將其加入冷凍的植物材料中之前必須預(yù)熱。
2．在適條件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纖維狀，很容易一下子就從溶液中鉤出。不過，某些植物種的DNA 沉淀中可能含有雜質(zhì)，特別是多糖，使DNA 沉淀呈絮狀或膠狀，這種情況下可能需要稍事離心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．飽和酚雖然可有效地使蛋白質(zhì)變性，但酚不能*抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液，可減輕這兩種現(xiàn)象，同時(shí)可加入適量的（*——=25:24:1），的作用是消泡，并使蛋白質(zhì)層緊密，使水相和有機(jī)相分層較好。細(xì)菌的培養(yǎng)和收集將含有質(zhì)粒pBS 的DH5α菌種接種在LB 固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24 小時(shí)。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB 液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12 小時(shí)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期。非凍型組織RNA保存液小量提取法對(duì)于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA 十分有用。這些方法共同特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，能同時(shí)處理大量試樣,所得DNA 有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
DiI( 細(xì)胞膜紅色熒光探針 )10mg說明書的產(chǎn)品圖片：

操作流程：
1． DiI( 細(xì)胞膜紅色熒光探針 )10mg說明書根據(jù)要保存的各樣本的體積，計(jì)算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量應(yīng)當(dāng)是組織體積的10倍（100mg組織約用1ml RNAwait）；離心收集2×107細(xì)胞RNAwait的用量是1ml。加入RNAwait的原則是：量寧多勿少。建議在實(shí)際操作中不要稱量組織，而直接根據(jù)目測(cè)結(jié)果加入RNAwait量，以加快操作和減少污染。例如5mm邊長(zhǎng)的立方體組織塊，體積為125mm3=125µl，故應(yīng)當(dāng)加入1．25ml的RNAwait液。
2．將RNAwait按需要量分裝入自備保存管中。
3．快速將較大的組織切成厚度<0．5 cm的任意片狀，較小的組織直接取下，立即*浸入RNAwait中。組織的厚度一定要<0．5 cm。組織過厚則RNAwait不能有效滲入，組織中間部位的RNA不能受到保護(hù)。較大的組織可以切成厚度<0．5 cm的任意片狀后保存，較小的組織（如大鼠的腎臟、脾臟，小鼠的大部分器官）則可以直接浸入RNAwait。
4．將收集管存放于溫度適當(dāng)?shù)牡胤剑娣艜r(shí)間不能超過該溫度下的長(zhǎng)存放時(shí)間(請(qǐng)看技術(shù)指標(biāo))，如果要存放在-20℃或-80℃，需先將樣品在4℃放置過夜后再轉(zhuǎn)移到后的溫度。注：將樣品轉(zhuǎn)移到-20℃或-80℃前，需要棄掉保護(hù)液。
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注意：
1. DiI( 細(xì)胞膜紅色熒光探針 )10mg說明書對(duì)大腸桿菌可從固體培養(yǎng)基上挑取單個(gè)菌落直接進(jìn)行煮沸法提取質(zhì)粒DNA。
2. 煮沸法中添加*有一定限度,濃度高時(shí),細(xì)菌裂解效果反而不好。有時(shí)不同*也能溶菌。
3. 提取的質(zhì)粒DNA 中會(huì)含有RNA,但RNA 并不干擾進(jìn)一步實(shí)驗(yàn),如限制性內(nèi)切酶消化,亞克隆及連接反應(yīng)等。