實(shí)驗(yàn)原理感受態(tài)就是細(xì)菌吸收轉(zhuǎn)化因子的生理狀態(tài)，只有發(fā)展為感受態(tài)的細(xì)胞才能穩(wěn)定攝取外來的DNA分子。受體細(xì)胞經(jīng)過一些特殊方法（如：電擊法，CaCl2等化學(xué)試劑法）的處理后，細(xì)胞膜的通透性發(fā)生變化，成為能容許帶有外源DNA的載體分子進(jìn)入的感受態(tài)細(xì)胞。elisa試劑盒
目前常用的感受態(tài)細(xì)胞制備方法有CaCl2 法，簡(jiǎn)便易行，且其轉(zhuǎn)化效率*可以滿足一般實(shí)驗(yàn)的要求，制備出的感受態(tài)細(xì)胞暫時(shí)不用時(shí)，可加入占總體積15％的無菌甘油于-70℃保存（半年），因此CaCl2法為使用更廣泛。
一、材料
大腸桿菌 E.coli DH5α，100ml三角瓶，1.5ml 離心管（又稱eppendorf管）, 離心管架，1000 ul 、200ul槍頭，大量冰塊，
二、設(shè)備
微量移液器（200μl,1000μl），高壓蒸汽消毒器（滅菌鍋），恒溫?fù)u床、冷凍離心機(jī), 超凈工作臺(tái), 紫外光度計(jì)，雙蒸水器，冰箱等。
三、試劑準(zhǔn)備
1、LB液體培養(yǎng)基：稱取蛋白胨（Tryptone）10 g，酵母提取物（Yeast extract） 5g，NaCl 10 g，溶于800ml蒸餾水中，用NaOH調(diào)pH至7.5, 加水至總體積1升，高壓下蒸氣滅菌15分鐘。
2、LB固體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基中每升加12g瓊脂粉，高壓滅菌。
3、高壓滅菌的0.1mo1／L CaCl2：母液1M CaCl2147 g CaCl2 2H2O，加水到1L
4、高壓滅菌過的30％甘油elisa試劑盒
四\操作步驟
大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備
（1） （已預(yù)先準(zhǔn)備好）從新活化的E.coli DH5α菌平板上挑取一單菌落（超凈工作臺(tái)操作），接種于3～5ml LB液體培養(yǎng)中，37℃振蕩培養(yǎng)12h左右，直至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。將該菌懸液以1：100～1：50轉(zhuǎn)接于20ml LB液體培養(yǎng)基中，37℃振蕩擴(kuò)大培養(yǎng)，當(dāng)培養(yǎng)液開始出現(xiàn)混濁后，每隔20～30min測(cè)一次OD600nm，至OD600nm≤0.5時(shí)停止培養(yǎng)；
（2） 取培養(yǎng)液1.5ml轉(zhuǎn)入微量離心管中，在冰上冷卻10min，于4℃，5000r／min離心10min（從這一步開始，所有操作均在冰上進(jìn)行，速度盡量快而穩(wěn)）。
（3） 倒凈上清培養(yǎng)液，用1ml冰冷的0.1mo1／L CaCl2溶液輕輕懸浮細(xì)胞，冰浴，0～4℃，5000r／min離心10min；
（4） 棄去上清液，加入500µl冰冷的0.1mo1／L CaCl2溶液，小心懸浮細(xì)胞。0～4℃，5000r／min離心10min；
（5） 棄去上清液，加入100µl冰冷的0.1mo1／L CaCl2溶液，小心懸浮細(xì)胞，冰上放置片刻后，即制成了感受態(tài)細(xì)胞懸液；
（6） 制備好的感受態(tài)細(xì)胞懸液可直接用于轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，也可加入占總體積15％左右高壓滅菌過的甘油，混勻后在超凈工作臺(tái)分裝到Eppendorf微量離心管中，液氮速凍后，置于-70℃條件下，可保存半年至一年。elisa試劑盒
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