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人胚胎氣管組織來源細(xì)胞；CCC-HBE-2培養(yǎng)

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)代理商

所  在  地上海市

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更新時間：2017-01-19 16:10:03瀏覽次數(shù)：328次

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產(chǎn)品簡介

人胚胎氣管組織來源細(xì)胞；CCC-HBE-2培養(yǎng)，細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

產(chǎn)品名稱人胚胎氣管組織來源細(xì)胞；CCC-HBE-2培養(yǎng)
貨期3－5天
發(fā)貨地上海

細(xì)胞名稱  人胚胎氣管組織來源細(xì)胞；CCC-HBE-2培養(yǎng)
形態(tài)特性  
生長特性  貼壁生長
特征特性   取材自引產(chǎn)的11周男性胚胎組織，該細(xì)胞由中國醫(yī)學(xué)*基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞資源中心建立。 
培養(yǎng)條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  20%FBS
傳代方法   1:3傳代；3~4天1次。
傳代情況  P4
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  培養(yǎng)法（-）
STR   
同工酶  
染色體   
使用權(quán)限  A類

復(fù)蘇操作要點(diǎn)： 
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。 
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
人操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
gfFLT-3    英文名稱：    FMS樣*激酶3    ?0.2ml
Phospho-FLT3(Tyr591)    英文名稱：    磷酸化FMS樣*激酶3    ?0.1ml
Phospho-FLT3 (Tyr589 + Tyr591)    英文名稱：    磷酸化FMS樣*激酶3    ?0.1ml
Phospho-FLT3 (Tyr842)    英文名稱：    磷酸化FMS樣*激酶3    ?0.1ml
Phospho-FLT3 (Tyr969)    英文名稱：    磷酸化FMS樣*激酶3    ?0.1ml
Phospho-c-Fos (Ser32)    英文名稱：    磷酸化c-fos抗體    ?0.1ml
Phospho-c-Fos(Thr232)    英文名稱：    磷酸化c-fos抗體    ?0.1ml
Phospho-c-Fos (Thr325)    英文名稱：    磷酸化c-fos抗體    ?0.1ml
FIH1    英文名稱：    缺氧誘導(dǎo)因子1α抑制蛋白抗體    ?0.2ml
F1 operon positive regulatory protein(NT)    英文名稱：    肺鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白抗體（N端）    ?0.2ml
Factor H    英文名稱：    補(bǔ)體因子H抗體    ?0.1ml
FSH beta    英文名稱：    促卵泡刺激素抗體    ?0.1ml
FOX3    英文名稱：    神經(jīng)元核抗原抗體    ?0.1ml
FAM135B    英文名稱：    FAM135B蛋白抗體    ?0.2ml
Fibulin 1    英文名稱：    “衰老關(guān)鍵蛋白”抗體    ?0.2mlHCG(Human Chorionic Gonadotrophin) ELISA Kit  人絨毛膜促腺激素    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Beta-CG(Human Chorionic Gonadotrophin Beta) ELISA Kit  人絨毛膜促腺激素β    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
LH(Human luteotropic hormone) ELISA Kit  *    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
PS(Human Prednisolone) ELISA Kit  人*龍    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
LEP(Human Leptin) ELISA kit  人瘦素    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
LR/Ob-R(Human Leptin receptor) ELISA KIT  人苗條素受體    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
HGH(Human growth hormone) ELISA KIT  人生長激素    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
EPO(Human Erythropoietin) ELISA Kit  人紅細(xì)胞生成素    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
EPOR(Human Erythropoietin receptor) ELISA Kit  人紅細(xì)胞生成素受體    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
TUBB(Human Beta-tubulin) ELISA kit  人β-微管蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
PGF2 Alpha(Human Prostaglandin F2 Alpha) ELISA Kit  人前列腺素F2α    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
tPSA(Human total prostate s pecific antigen) ELISA Kit  人總前列腺特異抗原    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T

 

 


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