【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞；EA.hy926使用說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性 梭形
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 在PEG脅迫下，將原代培養(yǎng)的人臍靜脈細(xì)胞與抗硫*的A549克隆株融合，構(gòu)建了人臍靜脈細(xì)胞株, EA.hy926。 融合子在HAT培養(yǎng)基上生長(zhǎng)并以八因子相關(guān)抗原篩選。 EA.hy926已經(jīng)過(guò)100次以上的群體倍增(PDLs)。 電鏡照片顯示W(wǎng)eibel-Palade小體的細(xì)胞質(zhì)分布以及組織特異性的細(xì)胞器，分化的內(nèi)皮細(xì)胞特性如血管生成，體內(nèi)平衡/血栓形成，血壓及炎癥反應(yīng)。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:2傳代；2-3天傳代一次。
傳代情況
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+27%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR Amelogenin：X；CSF1PO：10,11,12；D13S317：11；D16S539：11，12；D18S51：13,15,17；D19S433：13,14；D21S11：28,29,32；D2S1338：22,24；D3S1358：15,16；D5S818：11；D7S820：8,9,10；D8S1179：13；FGA：22,23；TH01：6,8,9.3；TPOX：8,9；vWA：14,17；
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類(lèi)
復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
SO(Human anti-streptolysin O) ELISA Kit 人抗鏈球菌溶血素O/抗O Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
ACA(Human adrenal cortex antibody) ELISA Kit 人腎上腺皮質(zhì)抗體 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
GBM(Human glomerular basement membrane antibogy) ELISA Kit 人抗腎小球基底膜抗體 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
BMG/ Beta2-MG(Human Beta2-microglobulin) ELISA Kit 人β2微球蛋白 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
ANX- V (Human Annexin V ) ELISA Kit 人膜聯(lián)蛋白Ⅴ Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
TBM(Human tubular basement membrane antibogy) ELISA Kit 人抗腎小管基底膜抗體 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
AP13(Human apelin 13) ELISA Kit 人apelin 13 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
AP36(Human Apelin 36) ELISA Kit 人Apelin 36 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
Tn-T(Human Troponin T) ELISA Kit 人肌鈣蛋白T Multi-class antibodies 規(guī)格： 48T
ES-Ab(Human anti-Endostatin antibody) ELISA Kit 人血管內(nèi)皮抑素抗體 Multi-class antibodies 規(guī)格： 48TRIK1 英文名稱： *受體紅藻氨酸離子1抗體 ?0.2ml
GRASP 英文名稱： 一般受體磷酸肌醇相關(guān)支架蛋白1抗體 ?0.2ml
GRIK5 英文名稱： *受體紅藻氨酸離子5抗體 ?0.1ml
GODZ 英文名稱： 棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶GODZ抗體 ?0.2ml
GPSM1 英文名稱： G蛋白信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白1抗體 ?0.2ml
GABA A Receptor beta 2 + 3 英文名稱： G氨基丁酸受體β2+3/GABAA Rβ2+GABAA Rβ2抗體 ?0.2ml
G protein alpha 英文名稱： G蛋白α抗體 ?0.2ml
G protein beta subunit like 英文名稱： G蛋白β樣蛋白抗體 ?0.2ml
GTF2B 英文名稱： 通用轉(zhuǎn)錄因子GTF2B抗體 ?0.2ml
phospho-gp130 (Ser782) 英文名稱： 磷酸化gp130抗體 ?0.1ml
GLTPD2 英文名稱： 糖脂轉(zhuǎn)移蛋白結(jié)構(gòu)域2抗體 ?0.2ml
GOLGA6L4 英文名稱： 高爾基體膜相關(guān)蛋白6樣蛋白4抗體 ?0.2ml
GIPC-2 英文名稱： 胞漿區(qū)相關(guān)蛋白GIPC2抗體 ?0.2ml
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