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人胚肺成纖維細(xì)胞；WI-38 WI38培養(yǎng)

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更新時間：2017-01-19 17:21:09瀏覽次數(shù)：345次

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產(chǎn)品簡介

人胚肺成纖維細(xì)胞；WI-38 [WI38]培養(yǎng)，細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 人胚肺成纖維細(xì)胞；WI-38 [WI38]培養(yǎng)
形態(tài)特性   成纖維細(xì)胞樣
生長特性貼壁生長
特征特性   Leonard Hayflick建系；有限傳代細(xì)胞系；壽命為50±10代（倍增時間24h）；來自3個月的正常胚胎肺組織。該細(xì)胞系是*個用于人疫苗制備的*；培養(yǎng)基中添加TNFα可以加快細(xì)胞生長。
培養(yǎng)條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 P14
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 B類

產(chǎn)品名稱	人胚肺成纖維細(xì)胞；WI-38 [WI38]培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

人胚肺成纖維細(xì)胞；WI-38 [WI38]培養(yǎng)復(fù)蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。
人胚肺成纖維細(xì)胞；WI-38 [WI38]培養(yǎng)操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
DAMTS4(Human ADAM metallopeptidase with thrombospondin type 1 motif4) ELISA Kit 人ADAM金屬肽酶含血小板反應(yīng)蛋白1基元4   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Human similar to RIKEN cDNA 4933429F08 gene ELISA Kit 人類似RIKEN cDNA 4933429F08 基因   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
PAQR7(Human progestin and adipoQ receptor family member VII ) ELISA Kit 人孕酮和adipoQ受體家族成員Ⅶ   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
COLEC11(Human collectin sub-family member 11) ELISA Kit 人集蛋白亞家族成員11   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Serpina3g(Human serine/cysteine peptidase inhibitor clade A member 3G) ELISA Kit 人*蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進(jìn)化枝3G   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Human similar to RIKEN cDNA A630077B13 gene ELISA Kit 人類似RIKEN cDNA A630077B13 基因   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Human similar to RIKEN cDNA 3110050K21 gene ELISA Kit 人類似RIKEN cDNA 3110050K21 基因   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Human similar to RIKEN cDNA 2610307008 gene ELISA Kit 人類似RIKEN cDNA 2610307008 基因   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
human similar to RIKEN cDNA 2010109K09 gene ELISA KIT 人類似RIKEN cDNA 2010109K09 基因   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
RHOB(Human ras homolog gene family,memmber B) ELISA Kit 人ras同源物基因家族成員b   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48TGLP-1R   英文名稱：   胰高血糖素樣肽-1受體/GLP-1受體抗體   ?0.1ml
GPI   英文名稱：   糖磷脂酰肌醇抗體   ?0.1ml
phospho-gp130 (Ser782)   英文名稱：   磷酸化gp130抗體   ?0.1ml
Glutathione Transferase zeta 1   英文名稱：   *S轉(zhuǎn)移酶ζ1抗體   ?0.1ml
GLYAT   英文名稱：   甘胺酸-N-酰基轉(zhuǎn)移酶抗體   ?0.2ml
GLYATL1   英文名稱：   甘胺酸-N-酰基轉(zhuǎn)移酶樣1抗體   ?0.2ml
G3PP   英文名稱：   轉(zhuǎn)運蛋白G3PP抗體   ?0.2ml
Phospho-Glycogen synthase 1(Ser645)   英文名稱：   磷酸化葡萄糖合成酶1抗體   ?0.1ml
Glycogenin 1   英文名稱：   糖原蛋白1   ?0.2ml
GRAP   英文名稱：   生長因子受體結(jié)合蛋白2相關(guān)接頭蛋白抗體   ?0.1ml
人胚肺成纖維細(xì)胞；WI-38 [WI38]培養(yǎng)GRB 14   英文名稱：   生長因子受體結(jié)合蛋白14抗體   ?0.1ml
GLYCTK   英文名稱：   HBeAg結(jié)合蛋白4/甘油激酶抗體   ?0.2ml
GLYATL2   英文名稱：   甘胺酸-N-酰基轉(zhuǎn)移酶樣2抗體   ?0.2ml
Glypican 2   英文名稱：   磷脂酰基醇蛋白聚糖2抗體   ?0.2ml
GLYR1   英文名稱：   氧化還原酶GlyR1/核蛋白60抗體   ?0.2ml