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EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY0923使用說明書

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EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY0923使用說明書細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY0923使用說明書
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性懸浮生長(zhǎng)
特征特性   該細(xì)胞系來源于一成年男性的外周血。2009年由中科院昆明細(xì)胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)   15%NBS
傳代方法   1:2傳代；5-6天一次
傳代情況 P2
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法（-）
STR   -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

產(chǎn)品名稱	EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KMY0923使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Kv4.3   英文名稱：   離子通道蛋白Kv4.3抗體   ?0.1ml
KLLN    英文名稱：   Killin-p53調(diào)節(jié)復(fù)制抑制蛋白抗體   ?0.2ml
Lysyl tRNA synthetase   英文名稱：   賴氨酸t(yī)RNA的連接酶抗體   ?0.2ml
Kidins220   英文名稱：   220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗體   ?0.2ml
phospho-Kidins220 (Ser918)   英文名稱：   磷酸化220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗體   ?0.1ml
KRV-VP1 + KRV-VP2 (C-terminus)   英文名稱：   基爾曼氏細(xì)小病毒VP1/VP2抗體(大鼠潛在病毒KRV)C端   ?1ml
KCNQ1   英文名稱：   鉀離子通道蛋白家族KCNQ1抗體   ?0.1ml
KMT1A   英文名稱：   組蛋白H3 K9甲基轉(zhuǎn)移酶抗體   ?0.1ml
KAT13D   英文名稱：   生物鐘KAT13D蛋白抗體   ?0.2mlPABA(Mouse para-aminobenzoic acid) ELISA Kit 小鼠對(duì)氨基苯甲酸   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
hs-CRP(Mouse high sensitivity C-Reactive Protein) ELISA Kit 小鼠超敏C反應(yīng)蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Beta2-GP1 IgA/G/M(Mouse Beta2-glycoprotein 1 antibody IgA/G/M) ELISA Kit 小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
LAT(Mouse Linker for activation of T cell) ELISA Kit 小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
EMAb(Mouse Endometrium Antibody) ELISA Kit 小鼠抗子宮內(nèi)膜抗體   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
LDL-IC(Mouse LDL-IC) ELISA Kit 小鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
UU-Ab(Mouse Ureaplasma urealyticum antibody) ELISA Kit 小鼠解脲脲原體抗體   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
GFAP(Mouse glial fibrillary acidic protein) ELISA Kit 小鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
pANCA(Mouse Perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antibody) ELISA Kit 小鼠抗中粒細(xì)胞核周抗體   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
PI Ab-IgG/IgM(Mouse phosphatidylinositol antibody IgG/IgM) ELISA Kit 小鼠磷脂酰肌醇抗體IgG/IgM   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
15-LO/LOX(Mouse 15-lipoxygenase) ELISA Kit 小鼠15脂加氧酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
IFN- Beta/IFNB(Mouse Interferon Beta) ELISA Kit 小鼠β干擾素   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T