【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人神經母細胞瘤細胞;SK-N-SH使用說明書
形態特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞是由Biedler JL建立的兩株神經組織來源的細胞中的一株(另一株是SK-N-MC)。與SK-N-MC不同,該細胞倍增時間更長,表達更高水平的多巴胺-β-羥化酶;常作為細胞介導的細胞毒性分析的靶細胞。
培養條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:3~1:8傳代;每周換液1~2次。
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:11;D13S317:11;D16S539:8,13;D18S51:13,16;D19S433:13,14;D21S11:31,31.2;D2S1338:17,19;D3S1358:15,16;D5S818:12;D7S820:7,10;D8S1179:15;FGA:23.2,24;TH01:7,10;TPOX:8,11;vWA:14,18;
同工酶
染色體 44~48
使用權限 A類
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Anti-Brucella/Biotin *標記抗布魯氏菌抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-BSEP/FITC 熒光素標記膽汁酸鹽輸出泵蛋白抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-BSP/FITC 熒光素標記骨涎蛋白抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Goat Anti-human C3/FITC 熒光素標記羊抗人補體C3 IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-C5a/FITC 熒光素標記過敏毒素C5a(補體C5a)抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-C5b-9/TCC/FITC 熒光素標記末端補體復合物C5b-9抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-CA125/FITC 熒光素標記卵巢癌抗原抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-CA15-3/FITC 熒光素標記癌相關抗原抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-phospho-c-Abl/v-abl(Tyr245) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化非受體*激酶c-Abl抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-phospho-c Abl/v-abl(Tyr412) /FITC 熒光素標記兔抗人、大,小鼠磷酸化非受體*激酶c-Abl抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2mlMYST1 英文名稱: 組蛋白乙酰轉移酶MOF抗體 ?0.2ml
Mesothelioma 英文名稱: 間質細胞蛋白抗體 ?0.2ml
MYL3 英文名稱: 肌球蛋白輕鏈3抗體 ?0.2ml
MDR1 英文名稱: 多藥耐藥蛋白/P-糖蛋白抗體 ?0.1ml
MIXL1 英文名稱: 同源結構蛋白1抗體 ?0.2ml
MAEA 英文名稱: 細胞增殖誘導蛋白5/肺癌相關蛋白10抗體 ?0.2ml
MYPN 英文名稱: 肌鈀蛋白抗體 ?0.2ml
MTMR2 英文名稱: 肌管素相關蛋白2抗體 ?0.2ml
MMP19 英文名稱: 基質金屬蛋白酶18/19抗體 ?0.2ml
MAGOH 英文名稱: 增殖相關蛋白MAGOH抗體 ?0.2ml