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人鼻咽癌細(xì)胞；CNE-2Z培養(yǎng)

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更新時間：2017-01-20 14:12:09瀏覽次數(shù)：284次

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產(chǎn)品簡介

人鼻咽癌細(xì)胞；CNE-2Z培養(yǎng)細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品名稱	人鼻咽癌細(xì)胞；CNE-2Z培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱 人鼻咽癌細(xì)胞；CNE-2Z培養(yǎng)
形態(tài)特性   上皮樣
生長特性貼壁生長
特征特性   1983年由谷淑燕、孔繁裔等建系；源自人鼻咽低分化鱗癌組織；原代細(xì)胞*消化，48小時開始生長，*傳代20天。裸鼠體內(nèi)移植*成瘤。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3~1:6傳代；2~3天1次。
傳代情況不詳
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測培養(yǎng)法（-）
STR   Amelogenin：X；CSF1PO：10，11；D13S317：10，12，13.3；D16S539：9，10，11；D18S51：13；D19S433：13；D21S11：27，30；D2S1338：17，23；D3S1358：15，18；D5S818：11，12；D7S820：10，12；D8S1179：12，17；FGA：18，21；TH01：7，9；TPOX：8，12；vWA：14，16；
同工酶
染色體   93~100，相互易位較多
使用權(quán)限 A類

復(fù)蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
Anti-Calpain 2/FITC 熒光素標(biāo)記鈣蛋白酶2抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-Calponin 1/FITC 熒光素標(biāo)記鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-Camk1g/FITC 熒光素標(biāo)記鈣/鈣調(diào)蛋白依賴蛋白激酶IG抗體 IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-CaMK2a/FITC 熒光素標(biāo)記鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-CaMK2b/FITC 熒光素標(biāo)記鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2b抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-CANX/FITC 熒光素標(biāo)記抗鈣連蛋白抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-ISR- Alpha/RBITC 紅色熒光素羅丹明標(biāo)記(RBITC)胰島素受體-α抗體IgG(標(biāo)記抗體)   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-CAP2/FITC 熒光素標(biāo)記環(huán)化酶相關(guān)蛋白CAP-2抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-Cap43/NDRG1 /FITC 熒光素標(biāo)記分化相關(guān)基因Cap43抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-CAS/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞凋亡敏感基因抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2ml
Anti-Casein/FITC 熒光素標(biāo)記抗牛酪蛋白抗體IgG   Multi-class antibodies   規(guī)格：   0.2mlMOBKL2C   英文名稱：   Mob1同源蛋白MOBKL2C抗體   ?0.2ml
MEGF5   英文名稱：   復(fù)合型表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體   ?0.2ml
MYLIP   英文名稱：   低密度脂蛋白受體的誘導(dǎo)降解蛋白抗體   ?0.1ml
ZNF144   英文名稱：   鋅指蛋白144抗體   ?0.2ml
MYF5   英文名稱：   生肌決定因子Myf5抗體   ?0.1ml
phospho-MYF5 (phospho Ser49)   英文名稱：   磷酸化生肌決定因子Myf5抗體   ?0.1ml
MRAP2   英文名稱：   黑素皮質(zhì)素2受體輔助蛋白2抗體   ?0.2ml
Metallothionein 3   英文名稱：   金屬硫蛋白3抗體   ?0.2ml
MAP4K6    英文名稱：   絲裂原活化蛋白激酶MAP4K6抗體   ?0.1ml