【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人急性T淋巴細胞性白血病細胞;I 2.1(CRL-2572)培養
形態特性 淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞為野生型Jurkat細胞系A3的FADD突變體;不表達FADD蛋白,抵抗Fas介導的死亡。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%FBS;1mM Hepes+1mM丙酮酸鈉
傳代方法 維持細胞濃度在0.2~2×106 cells/ml之間;2~3天換液1次。
傳代情況 C4
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:11,12;D13S317:8,11;D16S539:11;D18S51:13,21;D19S433:13,15.2;D21S11:31.2,33.2;D2S1338:19,23;D3S1358:15,17;D5S818:9;D7S820:8,10;D8S1179:12,14;FGA:19,22;TH01:6,9.3;TPOX:8,10;vWA:17,18;
同工酶
染色體
使用權限 A類
人急性T淋巴細胞性白血病細胞;I 2.1(CRL-2572)培養復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
人急性T淋巴細胞性白血病細胞;I 2.1(CRL-2572)培養操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
AAnti-CK34 BetaE12/FITC 熒光素標記高分子量角蛋白CK34βE12抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-CK-HMW/FITC 熒光素標記高分子量細胞角蛋白抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-CKMT2/FITC 熒光素標記肌酸磷酸激酶2抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-CKIP-1/FITC 熒光素標記酪蛋白激酶2相互作用蛋白1抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-CKLFSF2(human)/FITC 熒光素標記人類新細胞因子/趨化素樣因子超家族成員2抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-CLCA4/FITC 熒光素標記鈣激活氯離子通道4抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-CLDN1/FITC 熒光素標記緊密連接蛋白1抗體(C端)IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-CLDN1/FITC 熒光素標記緊密連接蛋白1抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2ml
Anti-ocludin-5/FITC 熒光素標記緊密連接蛋白-5抗體IgG Multi-class antibodies 規格: 0.2mlMFAP1 英文名稱: 微原纖維膠原相關蛋白1抗體 ?0.2ml
MND1 英文名稱: 減數分裂核分裂蛋白1抗體 ?0.2ml
MDFIC 英文名稱: 肌原調節抑制蛋白抗體 ?0.2ml
MDM2BP 英文名稱: 雙微體2癌基因結合蛋白抗體 ?0.2ml
MMP20 英文名稱: 基質金屬蛋白酶20 ?0.1ml
MRP8 英文名稱: 多藥耐藥相關蛋白8抗體 ?0.2ml
MRP7 英文名稱: 多藥耐藥相關蛋白7抗體 ?0.1ml
人急性T淋巴細胞性白血病細胞;I 2.1(CRL-2572)培養phospho-MLF1 Interacting Protein(Thr78) 英文名稱: 磷酸化卡波西氏肉瘤皰疹病毒潛伏核抗原相互作用蛋白1抗體 ?0.1ml
MATK 英文名稱: *蛋白激酶細胞分裂素抗體 ?0.2ml
MLF1 Interacting Protein 英文名稱: 卡波西氏肉瘤皰疹病毒潛伏核抗原相互作用蛋白1抗體 ?0.1ml