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小鼠雜交瘤細胞;3D10培養

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所  在  地上海

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更新時間:2017-02-13 15:57:31瀏覽次數:192次

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產品簡介

小鼠雜交瘤細胞;3D10培養細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療

細胞名稱  小鼠雜交瘤細胞;3D10培養
形態特性   淋巴母細胞樣
生長特性  半貼壁生長
特征特性   可產生單克隆抗體。 
培養條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況  C25
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陰性
STR  
同工酶  
染色體  
使用權限  A類

產品名稱小鼠雜交瘤細胞;3D10培養
貨期3-5天
發貨地上海

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
豚鼠基質金屬蛋白酶9(MMP-9)免疫試劑盒    guinea pig matrix metalloproteinase 9,MMP-9 ELISA Kit
豚鼠黃體激素(LH)免疫試劑盒    Guinea Pig Luteinizing Hormone,LH ELISA Kit
豚鼠*(cAMP)免疫試劑盒    Guinea pig cyclic adenosine monophosphate,cAMP ELISA Kit
豚鼠環磷酸鳥苷(cGMP)免疫試劑盒    Guinea pig Cyclic guanosine monophosphate,cGMP ELISA Kit
豚鼠過氧化脂質/乳過氧化物酶(LPO)免疫試劑盒    Guinea Pig lipid peroxlde,LPO ELISA Kit
豚鼠鉤端螺旋體IgG(Leptospira)免疫試劑盒    Guinea pig Leptospira IgG ELISA Kit
豚鼠催產素(OT)免疫試劑盒    Guinea Pig Oxytocin,OT ELISA Kit
豚鼠促腎上腺皮質激素(ACTH)免疫試劑盒    Guinea Pig adrenocorticotropic hormone,ACTH ELISA kit
豚鼠促卵泡素(FSH)免疫試劑盒    guinea pig follicle-stimulating hormone,FSH ELISA Kit-乙酰-L-*    shēng huà shì jì    容量:        25克
N-乙酰-L-苯*    shēng huà shì jì    容量:        100克
N-乙酰-L-半*    shēng huà shì jì    容量:        1公斤
N-乙酰-D-*    shēng huà shì jì    容量:        100克
N-乙酰-D-*    shēng huà shì jì    容量:        1公斤
n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷    shēng huà shì jì    容量:        1公斤
N-三(羥甲基)甲基*    shēng huà shì jì    容量:        20次/200ul/支
N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙磺酸鈉鹽    shēng huà shì jì    容量:    保存:-20℃    50次/300ul/支
N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙磺酸    shēng huà shì jì    容量:    保存:-20℃    50次/300ul/支
N-三(羥甲基)甲基-2-氨基乙磺酸鈉鹽    shēng huà shì jì    容量:    保存:-20℃    50次/300ul/支
N-三(羥甲基)甲基-2-氨基乙磺酸    shēng huà shì jì    容量:    保存:-20℃    50次/300ul/支
N-三(羥甲基)甲氨酸-2-羥基丙磺酸鈉鹽    shēng huà shì jì    容量:    保存:-20℃    50次/300ul/支

 

 

 


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