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小鼠雜交瘤細胞;IIB13培養

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所  在  地上海

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更新時間:2017-02-13 15:55:43瀏覽次數:217次

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產品簡介

小鼠雜交瘤細胞;IIB13培養細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

產品名稱小鼠雜交瘤細胞;IIB13培養
貨期3-5天
發貨地上海

細胞名稱  小鼠雜交瘤細胞;IIB13培養
形態特性   淋巴母細胞樣
生長特性  半貼壁生長
特征特性   可產生單克隆抗體。 
培養條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況  C20
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陰性
STR  
同工酶  
染色體  
使用權限  A類

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療
兔中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)免疫試劑盒    Rabbit neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA kit
兔脂蛋白α(Lp-α)免疫試劑盒    Rabbit lipoprotein α,Lp-α ELSIA Kit
兔載脂蛋白E(Apo-E)免疫試劑盒    Rabbit apolipoprotein E,Apo-E ELISA Kit
兔載脂蛋白B100(apo-B100)免疫試劑盒    Rabbit apolipoprotein B100,Apo-B100 ELISA Kit
兔載脂蛋白A1(apo-A1)免疫試劑盒    Rabbit apolipoprotein A1,Apo-A1 ELISA Kit
兔誘導型一氧化氮合成酶(iNOS)免疫試劑盒    Rabbit inducible nitric oxide synthase,iNOS ELISA KIT
兔游離睪酮(F-TESTO)免疫試劑盒    Rabbit free testosterone,F-TESTO ELISA kitHIV(愛滋?。?nbsp;   shēng huà shì jì    容量:    2~8℃    12毫升
D-異*    shēng huà shì jì    容量:        1公斤
D-*甲酯鹽酸鹽    shēng huà shì jì    容量:        500克
D-*    shēng huà shì jì    容量:    RT,避光    5克
D-纖維二糖    shēng huà shì jì    容量:        100克
D-天冬酰胺一水物    shēng huà shì jì    容量:        100克
D-色氨醇    shēng huà shì jì    容量:    RT    25克
D-乳酸脫氫酶    shēng huà shì jì    容量:    保存:-20℃,避光    1克
D-葡萄糖一水物    shēng huà shì jì    容量:        25克
D-葡萄糖酸溶液    shēng huà shì jì    容量:        25克
D-*    shēng huà shì jì    容量:        100克

 

 


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