細胞名稱 中國倉鼠肺細胞;CHL使用說明書
形態特性 成纖維細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 廣泛應用于染色體異常測試。
培養條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 胎牛血清,10%
傳代方法 消化3-5分鐘。1:3。3天內可長滿。
傳代情況 PN5
凍存條件 *培養基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 A類
復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
人*-半*連接酶調節亞基(GCLM)免疫試劑盒 Human GCLM ELISA Kit
人*[NMDA]受體亞基ε-2(NR-2)抗體免疫試劑盒 Human NR-2 Antibody ELISA Kit
人*[NMDA]受體亞基ε-2(NR-2)免疫試劑盒 Human NR-2 ELISA Kit
人孤腓肽(OFQ/N)免疫試劑盒 Human orphanin FQ/nociceptin,OFQ/N ELISA Kit
人鉤端螺旋體IgM(Lebtospira)免疫試劑盒 Human Lebtospira IgM ELISA Kit
人鉤端螺旋體IgG(Leptospira)免疫試劑盒 Human Leptospira IgG ELISA Kit
人弓蛔蟲(Tc)抗體(IgG)免疫試劑盒 Human Tc IgG ELISA kit二異丙酰胺鋰溶液(+4℃) Lithium diisopropylamide 4111-54-0
二正丙胺 Dipropylamine 142-84-7
二棕櫚酰-L-a-磷脂酰乙醇胺 1,2-DIPALMITOYL-SN-GLYCERO-3-PHOSPHOETHANOLAMINE 923-61-5
法尼醇 FARNESOL 4602-84-0
釩標準溶液 Vanadium standard solution, 1 mg/ml V(3+) in 2% HNO3, for AAS
富馬酸;反丁烯二酸;;紫堇酸;1,2-乙烯二羧酸 FuMaric Acid;Boletic acid;Lichenic acid;trans-1,2-Ethylenedicarboxylic acid 110-17-8
反丁烯二酸二丁酯 Dibutyl fumarate 105-75-9
反式-1,2-環己二胺四乙酸 TRANS-1,2-DIAMINOCYCLOHEXANE-N,N,N',N'-TETRAACETIC ACID MONOHYDRATE 125572-95-4
反式-9-(β-D-呋喃核糖玉米素) (-20℃) trans-Zeatin-riboside 6025-53-2