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中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（亞系克隆）；CHO-HCV-NS5A培養(yǎng)

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中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（亞系克隆）；CHO-HCV-NS5A培養(yǎng)細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

產(chǎn)品名稱	中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（亞系克隆）；CHO-HCV-NS5A培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（亞系克隆）；CHO-HCV-NS5A培養(yǎng)
形態(tài)特性   上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)
特征特性   CHO-HCV-C細(xì)胞整合有丙型肝炎病毒的Core基因，能穩(wěn)定表達(dá)C蛋白，是HCV基礎(chǔ)研究的*摸型。它由武漢大學(xué)病毒學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室郭佳博士于2008年構(gòu)建并保存。
培養(yǎng)條件   DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C19
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶同工酶鑒定
染色體
使用權(quán)限 A類

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
人富含半*蛋白61(Cyr61/CCN1)免疫試劑盒   Human Cyr61/CCN1 ELISA Kit
人副腫瘤性天皰瘡(PNP)抗體免疫試劑盒   Human PNP antibody ELISA kit
人復(fù)制蛋白A(RPA-70)免疫試劑盒   Human RPA-70 ELISA Kit
人附睪蛋白4(HE4)免疫試劑盒   Human HE4 ELISA kit
人*(CoQ10)免疫試劑盒   Human Coenzyme Q10,CoQ10 ELISA Kit
人*肽酶(PEPD)免疫試劑盒   Human PEPD ELISA Kit
人*羥化酶(PHD)免疫試劑盒   Human PHD ELISA Kit
人*/*富含性剪接因(SFPQ)免疫試劑盒   Human SFPQ ELISA Kit
人封閉蛋白4(CLDN4)免疫試劑盒   Human CLDN4 ELISA Kit鉻姆沙伯 W HP   Chromosorb W-HP
鉻姆沙伯 W NAW   Chromosorb W-NAW
鉻酸鈉   Sodium chromate tetrahydrate   10034-82-9
鉻酸鉛    Lead chromate   7758-97-6
媒染蘭 29   Mordant Blue 29   1667-99-8
鉻霧抑制劑   Chromium-fog inhibitor
正庚醛 95％   Heptaldehyde   111-71-7
1-庚磺酸鈉   Sodium 1-heptanesulfonate   22767-50-6
枸櫞酸鹽培養(yǎng)基   NA
*脫氫酶，牛肝（-20℃）   GLDH   9029/12/3
膠原蛋白 Type II（2-8°C）   Collagens polypeptide   9007-34-5
鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液   Cobalt   7440-48-4