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兔晶體上皮細胞永生系;N/N1003A(RLE)使用說明書

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更新時間:2017-02-13 12:05:01瀏覽次數:546次

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產品創新點
英文名稱:5,7-Dihydrox -4'-methoxyisoflavoneCAS 編號:491-80-5標準品別名:5,7-二羥基-4'-甲氧基異黃酮;鷹嘴豆黃素 A;生原禪寧,A5,7-二羥基-4’-甲氧基異黃酮;拜查林;染料木黃酮-4ˊ-甲醚雞豆黃素A$r$n英文名稱:3,5,7-TrihydroxyflavoneCAS 編號:548-83-4 標準品別名:3,5,7-三羥基黃酮;高良姜精高良姜素$r$n英文名稱:3,4-Dimethoxybenzoic acidCAS 編號:標準品別名:3,4-二甲氧基苯甲酸、3,4-二甲氧基苯酸、綠藜蘆酸、3,4-二甲氧芐酸藜蘆酸$r$n英文名稱:nomilinCAS 編號:1063-77-0標準品別名:諾米林$r$n英文名稱:(-)-GallocatechinCAS 編號:3371-27-5標準品別名:GC;(-)-倍兒茶酸;沒食子酰兒茶素;沒食子兒茶精;(-)-兒茶酸沒食子兒茶素$r$n英文名稱:AtractylodinCAS 編號:55290-63-6標準品別名:蒼術呋喃烴蒼術素
產品簡介

兔晶體上皮細胞永生系;N/N1003A(RLE)使用說明書細胞一般2-3天更換一次培養基,這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一,周三,周五更換培養基。

詳細介紹

產品名稱兔晶體上皮細胞永生系;N/N1003A(RLE)使用說明書 
貨期3-5天
發貨地上海

細胞名稱  兔晶體上皮細胞永生系;N/N1003A(RLE)使用說明書
形態特性   上皮樣
生長特性  貼壁生長
特征特性    
培養條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代;3~4天1次。
傳代情況  
凍存條件   基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  培養法(-)
STR   -
同工酶  
染色體  
使用權限  B類

復蘇操作要點: 
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。 
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。 
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。 
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療
人COLL2-1NO2 免疫試劑盒    Human COLL2-1NO2 ELISA kit
人CD68分(CD68)免疫試劑盒    Human CD68 ELISA kit
人CD63分(CD63)免疫試劑盒    Human CD63 ELISA Kit
人CD5分樣蛋白(CD5L)免疫試劑盒    Human CD5L ELISA Kit
人CD5分(CD5)免疫試劑盒    Human CD5 ELISA Kit
人CD4分(CD4)免疫試劑盒    Human CD4 ELISA Kit
人CD45分(CD45)免疫試劑盒    Human CD45 ELISA Kit
人CD44分(CD44)免疫試劑盒    Human CD44 ELISA Kit
人CD44變體6(CD44-v6)免疫試劑盒    Human clust三(羥甲基)甲基-2-氨基乙烷磺酸    N-(Tris(hydroxymethyl)methyl)-2-aminoethanesulfonic acid sodium salt    70331-82-7
三(羥甲基)甲基*    tris-hcl    5704/4/1
三苯基丙基溴化鏻    Triphenylpropylphosphonium bromide    15912-75-1
三苯    TriphenylMethane;1,1′,1″-Methylidenetris-[benzene]    519-73-3
三苯基氧化膦    Triphenylphosphine oxide    791-28-6
三氟甲磺酸鑭    LANTHANUM TRIFLUOROMETHANESULFONATE    52093-26-2
三氟甲磺酸鋰    Lithium triflate    33454-82-9
三氟甲磺酸鎂    MAGNESIUM TRIFLUOROMETHANESULFONATE    60871-83-2
三氟甲磺酸鈉    Sodium trifluoromethanesulfonate    2926-30-9
三氟甲磺酸釹    NEODYMIUM(III) TRIFLUOROMETHANESULFONATE    34622-08-7

 

 

 


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