dGTP 溶液,100mM0.5mL說明書產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
dGTP 溶液,100mM0.5mL說明書合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:深紅色或棕色粉末
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗
〖保存〗:RT
N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺鈉鹽
〖英文名稱〗:ADPS;N-Ethyl-N-(3-sulfopropyl)-3-methoxyaniline sodium salt
〖CAS號〗:82611-88-9
C12H18NO4SNa=295.33
〖級別〗:BR
純度:≥99%
摩爾吸收系數:≥8200(λmax255nm)
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:白色結晶粉末
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)新型Trinder's試劑是高水溶性苯胺衍生物,被廣泛用于診斷檢測和生化試驗。在比色法測定過氧化輕活性中比常規生色的試劑具有若干優勢。新型Trinder's試劑足夠穩定,既可以用于溶液也可以用于試驗流水線檢測系統中。在過氧化輕和過氧化物酶的存在下,新型Trinder's試劑在與4-氨基* (4-AA) 或3-甲基苯并噻唑砜腙(MBTH) 的氧化偶合反應過程中,形成非常穩定的紫色或藍色染料。與MBTH偶合染料的摩爾吸光度比與4-AA偶合染料的高1.5-2倍;然而,4-AA溶液比MBTH溶液更穩定。底物被其氧化酶酶促氧化產生過氧化輕。該過氧化輕的濃度對應于底物濃度。因此,可通過氧化偶合反應的顯色測定底物的量。葡萄糖、酒精、酰基-*和*可以用于檢測與新型Trinder's試劑及4-AA偶合的那些底物。現有10種新型Trinder's試劑。在新型Trinder's試劑中,TOOS是zui常用的。然而,對于特定的底物,試驗不同種類的新型Trinder's試劑對開發的檢測系統是必需的
〖保存〗:2~8℃
3,3'5,5'-四甲基聯苯胺丙磺酸鈉
葡萄糖 -6- 磷酸二鈉 弗氏不*佐劑
異丙基 -β-D- 硫代半乳糖苷 DH10B 感受態細胞
鄰硝基苯 -β-D- 吡喃半乳糖苷 XL2-Blue 感受態細胞
葡聚糖凝膠 G-75 中顆粒 BL21-CodonPlus(DE3) 感受態細胞
S1 核酸酶 Rosetta 感受態細胞
β -瓊脂糖酶 AGL1 農桿菌感受態細胞
透明質酸酶 EHA105 農桿菌感受態細胞
吸附樹脂 XAD7 GV3101 農桿菌感受態細胞
D- 果糖 -1,6- 二* LBA4404 農桿菌感受態細胞
* AH109 酵母感受態細胞
熒光胺 EGY48 酵母感受態細胞
萘啶酮酸 NMY51 酵母感受態細胞
彈性蛋白酶 ( 豬胰 ) Y187 酵母感受態細胞
CR 試劑盒