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即用型易錯(cuò) PCR 試劑盒100 次實(shí)驗(yàn)步驟

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即用型易錯(cuò) PCR 試劑盒100 次實(shí)驗(yàn)步驟運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

即用型易錯(cuò) PCR 試劑盒100 次實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專(zhuān)一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

即用型易錯(cuò) PCR 試劑盒100 次實(shí)驗(yàn)步驟合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專(zhuān)一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

靈敏性試驗(yàn)：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：棕色或橘紅色粉末，微溶于水，溶于醇和醚，易溶于酸性及堿性水溶液，其鈉鹽易溶于水。與金屬離子形成水溶性或不溶于水的配合物，配合物多為紅色或紅紫色。〖熔點(diǎn)〗188℃
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)絡(luò)合滴定指示劑，測(cè)定鉍、鎘、銅、鎵、汞、銦、錳、〖鎳〗、〖鉛〗、釷、駝(III)、〖鋅〗、鑭系元素離子等。光度測(cè)定鉍、鈷、銅、鎵、銦、鑭系元素、錳、鉬、鈮、〖鎳〗、镎、鋨、〖鉛〗、鈀、銠、釕、鈧、鉭、駝(III)、鈦、鈾和釩
〖保存〗：RT，避光
4-（2-吡啶偶氮）*鈉鹽
〖英文名稱(chēng)〗：PAR sodium salt；4-(2-Pyridylazo)resorcinol monosodium salt
〖其他名稱(chēng)〗：吡啶-(2-偶氮-4)*一鈉鹽；4-(2-吡啶偶氮)*單鈉鹽一水物
〖CAS號(hào)〗：16593-81-0
C11H8N3NaO2·H2O=255.21
〖級(jí)別〗：IND
純度：≥95.0%
Maximum UV absorption：411 nm
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：橙棕色至棕色結(jié)晶粉末。易溶于水和乙醇，水溶液呈黃色，不溶于乙迷。zui大吸收波長(zhǎng) 411nm。有刺激性。

DNA 75% 乙醇   EcoR I-Not I-BamH I 接頭
lambda(λ)DNA   白細(xì)胞裂解液
lambda(λ)DNA   酵母 DNAout
lambda(λ)DNA   柱式酵母 DNAout
即用型熒光定量 PCR 試劑盒   玻璃珠法柱式酵母 DNAout
即用型熒光定量 PCR 試劑盒   96 孔板質(zhì)粒 DNAout( 真空法 )
Tth DNA 聚合酶   Cy3-dCTP 溶液，10mM
AMV 逆轉(zhuǎn)錄酶   Cy5-dCTP 溶液，10mM
電泳甘油   Sephadex G50 介質(zhì)
XL1-Blue 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞   DAB 法雜交試劑盒
BL21(DE3) 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞   TMB 法雜交試劑盒
(3)φX174 DNA/Hae