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miRNA 熒光定量檢測試劑盒25 次實驗步驟

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更新時間:2017-01-19 14:55:35瀏覽次數:467次

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產品簡介

miRNA 熒光定量檢測試劑盒25 次實驗步驟運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

miRNA 熒光定量檢測試劑盒25 次實驗步驟產品介紹:

miRNA 熒光定量檢測試劑盒25 次實驗步驟產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

硝酸鹽:≤0.01%
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:白色或微帶黃綠色結晶或結晶性粉末。略有風化性。溶于約0.5份水,溶于乙醇、乙迷
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)各種生物堿、含氮堿、酚、蛋白質、蛋白胨、氨基酸、脲酸、脲、血液和糖類的試劑。生物染色。
〖保存〗:RT
賴納克氏鹽
〖英文名稱〗:Reinecke salt;Ammonium reineckate;Ammonium tetrathiocyanatodiamminechromate
〖其他名稱〗:雷氏鹽;利英納克鹽;四硫基二氨絡鉻酸銨;利英鈉克鹽;二氨基四硫代酸鉻銨;二氨合四硫基鉻酸銨(III)
〖CAS號〗:13573-16-5
NH4[Cr(NH3)2(SCN)4]=336.43
〖級別〗:AR
水溶解試驗:合格
對氯化*靈敏度試驗:合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:深紅色結晶或紅色結晶性粉末。溶于熱水和乙醇,微溶于冷水。在水溶液中分解游離氫青酸而成藍色。室溫時分解約在二周內發生,溫度高于65℃時速度加快。在沸乙醇中有相似分解發生。〖熔點〗 268~272℃(分解)。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)比色測定*及其他有機堿。伯胺、仲胺、*、羥基*和某些氨基酸的沉淀劑。汞的顯色劑和沉淀劑
〖保存〗:RT
賴納克氏鹽一水物

預染蛋白質電泳分子量標準 (43.0-200.0 KD)    烷基腺嘌呤 DNA 糖基化酶
DNA 洗脫液    甲酰胺嘧啶 [fapy]-DNA 糖基化酶
DNA 洗脫液    8- 氧代* DNA 糖基化酶
非酶 DNA 清除劑 -2    * -DNA 糖基化酶
即用型 PCR 試劑盒 2.0     *糖基化酶抑制劑
即用型 PCR 試劑盒 2.0     Afu * -DNA 糖基化酶
免質粒提取篩選試劑盒    人類單鏈選擇性單功能* -DNA 糖基化酶
一步法單菌落質粒 DNAout    DNA 促旋酶 (E.coli)
柱式真菌 DNAout    GpC 甲基轉移酶 (M.CviPI)
甜菜堿溶液,5M,PCR     熱敏磷酸酶
一步法質粒 DNAout 2.0    無機焦磷酸酶,熱穩定
一步法質粒 DNAout 2.0    無機焦磷酸酶 ( 酵母 )
酵母 tRNA 溶液 A( 粗提 )    三磷酸腺苷雙磷酸酶
酵母 tRNA 溶液 B( 精提 )    ATP 硫酸化酶
t    Dicer(RNase III)


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