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10nt 隨機(jī)引物，0.5μg/μL5μg實(shí)驗(yàn)方法

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10nt 隨機(jī)引物，0.5μg/μL5μg實(shí)驗(yàn)方法運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

10nt 隨機(jī)引物，0.5μg/μL5μg實(shí)驗(yàn)方法合成建文庫(kù)用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長(zhǎng)度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
10nt 隨機(jī)引物，0.5μg/μL5μg實(shí)驗(yàn)方法按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測(cè)。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

10nt 隨機(jī)引物，0.5μg/μL5μg實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長(zhǎng) cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)生物染色。指示劑
〖保存〗：RT
普魯士藍(lán)
〖英文名稱〗：Prussian Blue；Ferric ferrocyanide；Ferric hexacyanoferrate(II)；Chinese blue；Milori blue；Steel blue；Pigment blue 27；Hamburg blue；Berlin blue；Mineral blue
〖其他名稱〗：六合〖鐵〗(II)酸〖鐵〗；普魯士蘭；中國(guó)藍(lán)；貢藍(lán)；〖鐵〗藍(lán)；礦藍(lán)；柏林藍(lán)；亞〖鐵〗化〖鐵〗；華藍(lán)；密羅里藍(lán)；深藍(lán)
〖CAS號(hào)〗：14038-43-8
Fe4[Fe(CN)6]3=859.23
〖級(jí)別〗：BS
生物染色試驗(yàn)：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：深藍(lán)色粉末或塊狀。250℃失去全部水分而部分分解。幾乎不溶于水、稀酸及有機(jī)溶劑。新制成品可溶于草酸溶液。通常為含有一些〖水份〗和一些堿金屬的亞〖鐵〗化物。〖相對(duì)密度〗 1.80。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)細(xì)菌血清檢驗(yàn)中制備中國(guó)藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基時(shí)作指示劑(配100毫升溶液用1克)。生物標(biāo)本著色。氣體中除去硫化氫。
〖保存〗：RT
2-（5-溴-2-吡啶偶氮）-5-（二乙氨基）*
〖英文名稱〗：5-Br-PADAP；Bromo-PADAP；2-(4-Diethylamino-2-hydroxyphenylazo)-5-bromopyridine
〖其他名稱〗：2-(4-乙氨基-2-羥基苯偶氮)-5-溴吡啶；(5-溴-2-吡啶)偶氮-5-(二乙氨基)*；溴代2-吡啶基-二乙氨基*
〖CAS號(hào)〗：14337-53-2

10nt 隨機(jī)引物，0.5μg/μL5μg實(shí)驗(yàn)方法細(xì)菌 DNAout   小鼠抗 Flag 標(biāo)簽單抗
細(xì)菌 DNAout   小鼠抗 c-Myc 標(biāo)簽單抗
柱式腐殖酸清除劑   小鼠抗 c-Myc 標(biāo)簽單抗
柱式腐殖酸清除劑   小鼠抗 HA 標(biāo)簽單抗
柱式細(xì)菌 DNAout   小鼠抗 HA 標(biāo)簽單抗
柱式細(xì)菌 DNAout( 含* )   小鼠抗 GST 標(biāo)簽單抗
可保種型藍(lán)白 T 載體   小鼠抗 GST 標(biāo)簽單抗
PCR 抑制物清除劑   小鼠抗 V5 標(biāo)簽單抗
中草藥 DNAout   小鼠抗 V5 標(biāo)簽單抗
中草藥 DNAout   小鼠抗 MBP 標(biāo)簽單抗
一步式細(xì)菌 DNAout   小鼠抗 MBP 標(biāo)簽單抗
柱式無內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNAout   小鼠抗 GFP 標(biāo)簽單抗
可逆型 Taq DNA 聚合酶抑制劑   小鼠抗 GFP 標(biāo)簽單抗
RNase-free Tris HCl,1M,pH 7.0   小鼠抗 mCherry 標(biāo)簽單抗
RNase-free T