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即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒300 次原理

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更新時間:2017-01-19 15:15:10瀏覽次數:471次

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產品簡介

即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒300 次原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒300 次原理產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒300 次原理產品介紹:

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:無色片狀或針狀結晶。1g溶于10ml沸水或10ml熱乙醇、37.5ml沸苯。易溶于稀的堿性或酸性溶液,幾乎不溶于乙迷和石油醚。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)顯影劑。
〖保存〗:RT,避光
α-萘酚苯甲醇
〖英文名稱〗:α-Naphtholbenzein;4,4′-(α-Hydroxybenzylidene)di-1-naphthol;p-Naphtholbenzein
〖其他名稱〗:α-納富妥苯;4-[(4-羥基-1-萘基)苯基亞甲基]-1(4H)-萘酮;α-對萘酚苯;對萘酚苯甲醇;4,4’-(α-羥基亞芐基)二(1-萘酚);α-萘酚基萘酚醌基苯甲烷;α-萘酚醌苯基甲烷;α-萘酚醌烷;α-萘酚苯;1-萘酚苯;α-苯甲醇萘
〖CAS號〗:145-50-6
C27H18O2=374.43
〖級別〗:IND
純度:≥90.0%
pH變色域: 8.2(橙,黃)~9.8(藍,綠)
〖熔點〗:230~235℃
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:紅棕色或暗紅色或褐色粉末。對二氧化碳和酸非常靈敏。溶于乙醇、乙迷、苯和冰乙酸,不溶于水。有刺激性。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)酸堿指示劑,pH 8.5(黃)~9.8(綠)。
〖保存〗:RT,避光

血液 RNAout     Y1090 菌種
一管式病毒 RNAout    AH109 酵母菌種
一管式病毒 RNAout    EBY100 酵母菌種
植物 RNAout    GS190 酵母菌種
植物 RNAout    GS200 酵母菌種
固相 RNase 清除劑    KM71 酵母菌種
固相 RNase 清除劑    Rosetta-gami B(DE3)plysS 菌種
液相 RNase 清除劑    AG1 菌種
溴化乙錠清除劑    MDS 42recA 菌種
RNAi,RNA 干擾載體及基因片段等系列    ScarabXpress T7lac 菌種
RNA *保存液    BL21(DE3)plysS 菌種
核糖核苷復合物 (RVC),0.2M    TG1 菌種
微量 RNA 助沉劑    HB101 菌種
( 人源 )    


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