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T7 體外轉錄試劑盒50 次實驗步驟

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更新時間:2017-01-19 15:33:41瀏覽次數:2159次

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產品簡介

T7 體外轉錄試劑盒50 次實驗步驟運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

T7 體外轉錄試劑盒50 次實驗步驟產品介紹:

T7 體外轉錄試劑盒50 次實驗步驟產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

〖保存〗:-20℃。保質期5年
2,2′-聯氨-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺鹽
〖英文名稱〗:AzBTS-(NH4)2;Diammonium 2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate);2,2′-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt;ABTS diammonium salt
〖其他名稱〗:2,2’-連氮基-雙-(3-乙基苯并二氫噻唑啉-6-磺酸)二〖銨鹽〗;2,2'-二氮-雙(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)〖銨鹽〗
〖CAS號〗:30931-67-0 
C18H24N6O6S4=548.68
〖級別〗:試劑級
〖含量〗Dye content:≥98.0%
TLC:one spot
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:淡黃綠色至綠色粉末。溶于水
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)游離氯的光譜試劑,酶免顯色底物,過氧化物酶的底物,用于ELISA 步驟,該底物產生一種可溶性的顯綠色的終端產品可在405 nm處光譜讀取。這種反應可用1%SDS終止
〖保存〗:RT,保質期4年
ABTS液體底物
〖英文名稱〗:ABTS substrate liquid
〖其他名稱〗:2,2′-聯氨-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺鹽底物;2,2’-連氮基-雙-(3-乙基苯并二氫噻唑啉-6-磺酸)二〖銨鹽〗底物;2,2'-二氮-雙(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)〖銨鹽〗底物

尿道上皮細胞生長因子    剪切式勻漿機
平滑肌細胞生長因子    帶柄尼龍篩
平滑肌細胞生長因子 ( 不含血清 )    陶瓷研缽 ( 直徑 60 mm)
前列腺上皮細胞生長因子    陶瓷研缽 ( 直徑 75 mm)
前脂肪細胞生長因子    1μL 超微量分光光度計
上皮細胞生長因子    0.5mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)
上皮細胞生長因子    0.5mL DNA 離心超濾管 (30-50 KD)
上皮細胞生長因子 -2    0.5mL DNA 離心超濾管 (90-150 KD)
少突膠質前體細胞生長因子    0.5mL DNA 離心超濾管 (150-250 KD)
少突膠質前體細胞生長因子    0.5mLDNA 離心超濾管 (300-500 KD)
少突膠質細胞生長因子    4mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)
封堵液 (Nylon )


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