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植物種屬鑒定 PCR Mix 10100 次原理

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  核酸擴(kuò)增產(chǎn)品

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產(chǎn)品簡介

植物種屬鑒定 PCR Mix 10100 次原理運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

植物種屬鑒定 PCR Mix 10100 次原理合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
植物種屬鑒定 PCR Mix 10100 次原理按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

C12H14N4?4HC1?2H2O=396.15
〖級(jí)別〗：CP
水溶解試驗(yàn)：合格
對硒靈敏度試驗(yàn)：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：淡棕色粉末或白色結(jié)晶性粉末。對空氣和光敏感，受光照后色變深。易溶于水，不溶于非極性有機(jī)溶劑。室溫時(shí)在有機(jī)溶劑中穩(wěn)定，而在水溶液中不穩(wěn)定。〖熔點(diǎn)〗328～330℃(伴有分解)。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)度法測定硒的試劑。過氧化酶底物，適用于免疫印跡和免疫組織化學(xué)染色程序。該底物能產(chǎn)生一種不溶性棕色的末端產(chǎn)物。肉眼或可見光下就可觀察。。過氧化酶染色應(yīng)用：在聚丙烯酰胺凝膠上區(qū)分兩種分枝桿菌過氧化輕酶（mycobacterial catalase）；在聚丙烯酰胺凝膠上血紅色蛋白的專一指示劑。測定微量硒及釩。也用于組織學(xué)及超組織化學(xué)上，使產(chǎn)生嗜鋨氧化物
〖保存〗：RT，避光
碘化丙啶
〖英文名稱〗： PI；Propidium iodide；3,8-Diamino-5-(diethylaminopropyl)-6-phenylphenanthridinium iodide methiodide

柱式植物 mtDNAout，測序   乙酰水楊酸
柱式血液 mtDNAout，測序   異丙基 -β-D- 硫代半乳糖苷
柱式昆蟲 mtDNAout，測序   異硫氰酸胍
百萬堿基細(xì)菌 (G-)DNAout   異硫氰酸熒光素
百萬堿基細(xì)菌 (G+)DNAout   抑氨肽酶，5mg/mL
Southern 細(xì)菌 (G-)DNAout   *
Southern 細(xì)菌 (G+)DNAout   抑制與產(chǎn)生超氧陰離子自由基測試盒 ( 比色法 )
M13 噬菌體單鏈基因組 DNAout   銀染清除劑
λ 噬菌體 DNAout   吲哚
柱式 Ti 質(zhì)粒 DNAout    吲哚 -3- 丁酸
大提柱式 Ti 質(zhì)粒 DNAout   吲哚 -3- 乙酸
35×200mm)